[发明专利]一种B群流脑fHbp-V3重组蛋白及其制备方法，疫苗组合物，用途

权利要求书

1.一种如seq ID NO.1所示氨基酸序列的B群流脑fHbp-V3重组蛋白在制备同时预防B群流脑fHbp-V2和fHbp-V3菌株感染的疫苗中的应用。

2.一种疫苗组合物，其特征在于，包括如权利要求1所述的B群流脑fHbp-V3重组蛋白及作为佐剂的氢氧化铝、完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂。

3.如权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的B群流脑fHbp-V3重组蛋白含量为200µg/ml。

4.如权利要求3所述的疫苗组合物，其特征在于，所述氢氧化铝的含量为1mg/ml。

5.如权利要求1所述的B群流脑fHbp-V3重组蛋白在制备预防脑脊髓膜炎或菌血症疾病的疫苗中的用途。

6.如权利要求1所述的B群流脑fHbp-V3重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

获取基因序列：从中国疾控中心保存的B群流脑的fHbp基因亚变异型V3.94菌株通过PCR基因扩增的方法获取如seq ID NO.2所示的fHbp-V3基因的核苷酸序列，其中用于扩增的PCR引物分别为：上游引物：TGACCTGCCTCATTGATGC，下游引物：GCCGTCCGAACACGATAATTTACCG；

密码子优化：

去掉seq ID NO.2所示的fHbp-V3 基因的信号肽核苷酸序列并用lasergene软件进行大肠杆菌密码子偏好性优化合成获得如seq ID NO.3所述核苷酸序列；

构建原核表达质粒：

将经过密码子优化后的fHbp-V3基因与原核pET28a表达载体经NcoⅠ和EcoRⅠ限制性内切酶双酶切，基因片段回收后用T4 DNA连接酶进行连接，连接产物转化DH5α感受态细胞，培养，鉴定；

构建表达菌株：

构建成功的克隆转化BL21表达感受态细胞诱导，培养，诱导表达，并用SDS-PAGE蛋白电泳鉴定菌体蛋白的表达；筛选表达量高的菌株；

fHbp-V3重组蛋白的表达和纯化：

将表达量高的菌株进行培养、收集、破碎、纯化获得fHbp-V3重组蛋白。