[发明专利]强化丙酮酸合成L-亮氨酸能力的重组谷氨酸棒杆菌及应用

权利要求书

1.一种重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于：所述重组谷氨酸棒杆菌为ilvBNC操纵子和leuA基因的启动子序列位点替换为P_tuf启动子的谷氨酸棒杆菌；所述P_tuf启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，P_tuf启动子的插入载体为pK18mobsacB或pK19mobsacB；

所述重组谷氨酸棒杆菌中还通过过表达ilvBNC操纵子和leuA基因过表达异丙基苹果酸合成酶IPMS，所述ilvBNC操纵子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1，所示leuA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述谷氨酸棒杆菌为敲除了丙酮酸羧化酶编码基因pyc、丙氨酸转氨酶编码基因avtA且在丙氨酸转氨酶编码基因alaT插入T3终止子的谷氨酸棒杆菌C. glutamicum XQ-9∆ltbR∆avtAT3-alaT；所述谷氨酸棒杆菌C. glutamicum XQ-9∆ltbR∆avtAT3-alaT的构建方法包括以下步骤：

以谷氨酸棒杆菌C. glutamicumXQ-9∆ltbR的基因组为模板，分别构建丙酮酸羧化酶编码基因pyc的基因敲除框、丙氨酸转氨酶编码基因avtA的基因敲除框及包含T3终止子及alaT基因的替换框，利用质粒载体将所述丙酮酸羧化酶编码基因pyc的基因敲除框、丙氨酸转氨酶编码基因avtA的基因敲除框及包含T3终止子及alaT基因的替换框依次电转化谷氨酸棒杆菌C. glutamicum XQ-9∆ltbR，筛选出所述谷氨酸棒杆菌C. glutamicum XQ-9∆ltbR∆avtAT3-alaT；

所述丙酮酸羧化酶编码基因pyc的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述丙氨酸转氨酶编码基因avtA的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述T3终止子的核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示。

2.根据权利要求1所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于：过表达ilvBNC操纵子和leuA基因是以pECXK99E、pXMJ19、pDXW-8、pDXW-10、pJYW-4或pJC1作为表达载体。

3.根据权利要求1所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，所述质粒载体为pK18mobsacB或pK19mobsacB。

4.权利要求1所述的重组谷氨酸棒杆菌在发酵生产L-亮氨酸中的应用。