[发明专利]猪HDAC2基因的表达抑制剂及其应用

说明书

本发明公开了通过使用猪HDAC2基因的表达抑制剂可以有效提高猪克隆重构胚胎的发育率和囊胚时期的胚胎质量，即可以有效提高猪克隆重构胚胎的发育性能，从而可以提高猪体细胞克隆的克隆效率。本发明所述的猪HDAC2基因的表达抑制剂可以选自对猪HDAC2基因表达起抑制作用的siRNA和可以抑制猪HDAC2基因表达的化合物中的至少一种。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及猪HDAC2基因的表达抑制剂及其在制备具有提高猪克隆重构胚胎发育性能作用的产品中的应用。

背景技术

体细胞核移植技术(Somatic Cell nuclear transfer，SCNT)又称为体细胞克隆技术，是动物细胞工程技术的常用技术，是以体细胞为核供体，通过特殊的人工手段(显微操作、电融合等)将体细胞核移入去核卵母细胞中生成重构胚胎，重构胚胎经体外融合激活培养到一定阶段后，再移植入代孕母体内，使其发育为含有与供体细胞相同的遗传物质的克隆后代的技术。经体细胞核移植技术获得的动物成为克隆动物。

高度分化的体细胞核移入去核卵母细胞后，细胞核需要经过重编程来激活胚胎早期发育的关键基因，并抑制与分化相关的基因的表达，从而获得胚胎发育的全能性。目前研究普遍认为体细胞克隆效率低主要的原因在于卵母细胞对供体核的不完全或异常的重编程。细胞核的重编程主要涉及多种表观遗传修饰，如组蛋白修饰，DNA甲基化、X染色体失活、基因组印记等。

猪的体细胞克隆技术在基础科学研究、畜牧育种以及医学研究有着重要的应用价值，但目前体细胞克隆猪的整体生产效率仍然偏低，猪的克隆效率(相对于重构卵数量的效率)不超过0.3％，极大地限制了体细胞克隆猪的进一步推广和应用。

发明内容

本发明的目的在于提供猪HDAC2基因的表达抑制剂及其在提高猪克隆重构胚胎发育性能中的应用，以提高猪的克隆效率。

根据本发明的一个方面，提供了3个猪HDAC2基因的siRNA，分别为HDAC2-siRNA1、HDAC2-siRNA2和HDAC2-siRNA3；其中，HDAC2-siRNA1的核苷酸序列包括SEQ ID NO:1-2所示的核苷酸序列；HDAC2-siRNA2的核苷酸序列包括SEQ ID NO:3-4所示的核苷酸序列；HDAC2-siRNA3的核苷酸序列包括SEQ ID NO:5-6所示的核苷酸序列。

根据本发明的另一个方面，提供了猪HDAC2基因的表达抑制剂在制备具有提高猪克隆重构胚胎发育性能作用的产品中的应用。

在一些实施方式中，猪HDAC2基因的表达抑制剂可以选自对猪HDAC2基因表达起抑制作用的siRNA、化合物中的至少一种。

在一些实施方式中，对猪HDAC2基因表达起抑制作用的siRNA可以选自HDAC2-siRNA1、HDAC2-siRNA2、HDAC2-siRNA3中的至少一种。

在一些实施方式中，对猪HDAC2基因表达起抑制作用的化合物优选为可以特异性抑制猪HDAC2基因表达的化合物，可以为CAY10683(SantacruzamateA，CAS：1477949-42-0)。

根据本发明的又一个方面，提供了提高猪克隆重构胚胎发育性能的试剂盒，包括对猪HDAC2基因表达起抑制作用的siRNA。

在一些实施方式中，试剂盒可以包括独立包装的对猪HDAC2基因表达起抑制作用的siRNA和独立包装的对猪HDAC2基因表达起抑制作用的化合物。使用时，siRNA可以使用无菌、DNaseRNase free的胚胎注射级水配制成注射剂对激活后的猪克隆重构胚胎进行注射；化合物溶解后可以用培养液逐级稀释，然后添加到培养基中对1cell期的猪克隆重构胚胎进行孵育培养。

在一些实施方式中，试剂盒中对猪HDAC2基因表达起抑制作用的siRNA可以选自HDAC2-siRNA1、HDAC2-siRNA2、HDAC2-siRNA3中的至少一种。