[发明专利]纳米酶试纸条检测诺如病毒的方法

说明书

本发明公开纳米酶试纸条检测诺如病毒的方法，包括如下步骤：(1)纳米酶的合成；(2)纳米酶‑诺如抗体探针的制备；(3)纳米酶免疫层析试纸条的组装；(4)纳米酶免疫层析试纸条对诺如病毒的检测。本申请的纳米酶免疫层析试纸条的检测的灵敏度比胶体金试纸条可提高10倍，纳米酶免疫层析试纸条对诺如病原体检测的敏感性高、可靠性高，且对诺如病毒具有特异性识别。本申请的纳米酶试纸条检测诺如病毒的方法兼具胶体金技术的简便、快速、可现场应用的优点，又具有高灵敏度的特性，具有广阔的发展前景。

技术领域

本发明涉及诺如病毒检测技术领域。具体地说是纳米酶试纸条检测诺如 病毒的方法。

背景技术

诺如病毒(又称诺瓦克病毒，Norwalk Viruses)，是杯状病毒科家族中 的一员，是引起人类病毒性肠胃炎的主要原因之一，约占全世界腹泻病例的 18％。在发达国家，诺如病毒被认为是儿童和成人非细菌性腹泻爆发的最常 见原因，仅在美国每年就造成约1900-2100万人患病，56000-71000人住 院，570-800人死亡。虽然轮状病毒被认为是发展中国家儿童腹泻的主要原 因，在已将轮状病毒疫苗纳入免疫规划的国家，诺如病毒正迅速成为儿童严 重肠胃炎最常见的病原。最近的一项研究认为，发展中国家有20多万儿童 死于诺如病毒。

由此可见，诺如病毒仍具有一定的传染性和危害性，目前，对诺如病毒 的检测主要核酸检测和ELISA、胶体金等方法，当核酸检测和ELISA方法 技术繁杂，需要专业技术人员操作，胶体金试纸条灵敏度底，因此研制出诺 如病毒快速灵敏的检测方法非常必要。

诺如病毒为无包膜单股正链RNA病毒，变异速度快，每隔2-3年即可出 现引起全球流行的新变异株，环境抵抗力强、感染剂量低，感染后潜伏期短、 排毒时间长、免疫保护时间短，且传播途径多样、全人群普遍易感，因此， 诺如病毒具有高度传染性和快速传播能力。诺如病毒感染发病的主要表现为 腹泻和/或呕吐，国际上通常称之为急性胃肠炎。我国一直将其列入丙类传 染病中“其他感染性腹泻病”进行报告管理，这在一定程度上影响了以呕吐 为主要症状的诺如病毒感染病例及其暴发的报告。再加上诺如病毒具有自愈 性，所以，很多医院都不检查诺如病毒，这样就忽视了对诺如病的监控。诺 如病毒是全球急性胃肠炎散发病例和暴发疫情的主要致病原，疾病负担严重。 因此，应加强对诺如病毒的检测和控制。

在检测方面，诺如病毒无蛋白包膜，目前没法进行体外培养，限制了病 毒的分离和血清型分型鉴定。只有靠生化方法和分子生物学方法进行鉴定。

目前的主要检测方法有：

1.核酸检测和基因型鉴定，主要有Real-time RT-PCR和传统PCR，准 确度相对高，但过程繁琐，需要专门的仪器设备和专业技术人员。

2.抗原检测

抗原检测主要有ELISA方法，也已开发出大批的商品化试剂盒，可适用 于暴发疫情中大量样本的筛查，但ELISA试剂盒成本高、敏感性低，需要专 业技术人员操作，不够简便快捷。胶体金检测，是目前市场上最为普遍的快 捷检测，但灵敏度相对较低。目前，也逐渐有纳米金等免疫层析方法的研究。 以寻求简便快捷高灵敏度的检测方法。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种检测灵敏度高、操作简 便的纳米酶试纸条检测诺如病毒的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

纳米酶试纸条检测诺如病毒的方法，包括如下步骤：

(1)纳米酶的合成；

(2)纳米酶-诺如抗体探针的制备；

(3)纳米酶免疫层析试纸条的组装；

(4)纳米酶免疫层析试纸条对诺如病毒的检测。