[发明专利]一种针对少量样品的质谱检测方法

说明书

本发明属于质谱检测技术领域，具体为一种针对少量样品的质谱检测方法。本发明方法包括：设计质谱检测靶板，即对质谱检测靶板加以改进：检测孔的中心位置加刻十字刻线，以便定位；在检测孔内设置多个直径为微米级别的样品槽，用于重复检测，样品槽的直径不超过200µm，高度不超过10μm，以利于高精度检测；将少量样品精准富集到检测靶板的微米级的范围内，缩小体积提高浓度使其单位面积上的样品浓度满足质谱检测的条件；然后精准定位在微米级范围内实现高精度精准检测。本发明方法针对少量样品检测，可大大的缩短检测时间，提高检测的灵敏度，尤其适用于微生物等的检测，可免除大量的培养时间，打破传统意义上的少量样品无法及时检测的问题。

技术领域

本发明属于质谱检测技术领域，具体涉及一种针对少量样品的质谱检测方法。

背景技术

质谱分析法(Mass Spectroscope, MS)是用激光将未知化合物轰击成离子或碎片离子，按质荷比(m/z)飞行时间的不同进行测定，从而进行成分分析和结构分析的一种方法。根据质谱分析法的结果（质谱图）所提供的信息可以进行有机物、无机物的定性和定量分析，生物大分子的结构分析，同位素的测定及固体表面的结构和组成分析。

由于生物分子大多数以其高相对分子质量区别于分子质量在几十到几千的无机或有机小分子，因而生物质谱要求测定上万甚至几十万的分子质量。对于少量样品质谱主要用于解决两个生物分子的分析问题：其一是精确测定生物分子，如蛋白质、核苷酸和糖类等的分子量，并提供它们的分子结构信息；其二是对存在于生命复杂体系中相互作用的质谱数据分析，质谱可提供快速、易解的多组分的分析方法，且具有灵敏度高、选择性强、准确性好等特点，其适用范围远远超过放射性免疫检测和化学检测范围，在生物医学领域应用广泛。

目前用质谱检测样品面临一些问题，第一个问题，目前对于少量样品无法实时进行质谱检测进而无法分析，因为质谱检测不仅需要纯净物，而且需要足够的上样量，即质谱分析仪在检测样品时需要电离出足够的分子片段才能达到检测限。据统计目前90%以上的微生物都是不可培养的，无法用质谱直接去检测，即便少量微生物可培养，也需过夜培养甚至更长时间（肺结核的鉴定需要培养两周以上），对于混合颗粒物样品以及少量微生物都需要大量时间后续处理才能达到质谱检测的条件，不满足疾控、临床等需要及时快速响应的要求；第二个问题，质谱测试过程是在较大区域范围内随机检测几个位置上的样品，其余范围的样品均是无效的；第三个问题，在现有的测试条件下，对少量样品富集的精准度到不到，对于少量样品的检测目前质谱的灵敏度与准确度有待提高。针对现有的情况，如何才能进一步提高检测的灵敏度，打破传统质谱检测瓶颈，是困扰研发人员许久的难题。

发明内容

本发明的目的是提供一种针对少量样品的高灵敏度质谱检测方法，以解决少量样品无法检测的问题。

本发明提供的针对少量样品的高灵敏度质谱检测方法，包括：包括设计样品的高度富集以及精准检测靶板，将少量样品高度富集到检测靶板的微米级的范围内，缩小范围体积提高浓度使其单位面积上的样品浓度满足质谱检测的条件，然后精准定位在微米级范围内实现高灵敏度快速检测。本发明可大大的缩短质谱检测的周期，降低对于样品检测的要求，扩宽质谱应用范围。具体步骤如下：

（1）设计质谱检测靶板，即对质谱检测靶板加以改进：原有检测靶板有八行十二列检测孔，每个检测孔尺寸为2.5cm。在原有检测靶板上检测孔的中心位置加刻十字刻线，以方便后续样品槽定位；在检测靶板上检测大孔设置多个直径为微米级别样品槽（例如为5个），样品槽的直径不超过200µm，样品槽高度不超过10μm，并且底面整洁平整，以利于高精度检测；见图1所示；

（2）富集样品于检测靶板上：将少量样品富集于检测靶板的检测槽内，利用基质喷雾仪通过精准地喷涂的方式对微量样品裂解，裂解液厚度不宜超过10μm；也可以用点样的方式，点样的体积不超过10μl,根据样品的不同可重复点样；

其中：

所述富集的方式为激光分选、微流控分选、液滴包裹等方式，但不限于此；