[发明专利]一种CD55基因表达检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种CD55基因表达检测试剂盒，其包括针对CD55基因mRNA的茎环状捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括有扩增探针和末端修饰有树状荧光基团的标记探针；其中，所述茎环状捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：茎部结构序列，能与目标mRNA结合的特异性P1序列、间隔臂序列、P2序列；所述扩增探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与茎环状捕获探针的P2序列互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述标记探针具有与扩增探针P4序列互补配对的P5序列，且末端修饰有树状荧光基团。上述试剂盒具有灵敏度高、特异性强、准确率高等优点，可用于检测生物样本中CD55基因的表达水平。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种CD55基因表达检测试剂盒。

背景技术

CD55又称为衰变加速因子(DAF)，最早由Hofmann于1969年从人红细胞表面分离出来；自此，CD55被认为是一种糖基磷脂酰肌醇膜蛋白，广泛存在于血液、基质、上皮和内皮细胞中。其基因定位于人类染色体1q32.2，包含15个外显子；其主要功能是作为补体调节蛋白同C2竞争与C4b结合，抑制C3转化酶形成以及促进其分解，同时抑制补体C3的沉积和激活，因此能抑制补体经典途径和旁路途径(Dho S H et al.,Immune network,2018,18,e11)。

近年来，研究表明，CD55基因表达水平的变化与多种疾病有关，包括癌症，CD55在癌症预后和治疗方面具有重要的临床意义。因此，有必要开发一种CD55基因表达检测试剂盒，该试剂盒将有助于进一步深入研究CD55基因表达在各种肿瘤发生发展、预后及治疗方面的临床意义，并将为肿瘤的诊断、预后和治疗提供有用的临床辅助信息。

目前文献报道的用于临床样本CD55表达检测的方法主要是免疫组化的方法。该方法是利用手术或穿刺后取得的肿瘤组织进行切片染色，检测的是肿瘤组织中CD55蛋白的表达情况，具有检测成本低、操作简单、耗时短，可实现自动化检测和染色后切片便于存档等优点。但是，免疫组化的一些不足成为临床上CD55表达检测所面临的新问题，主要有：①免疫组化法容易受到受检组织固定时间、固定液的选择、抗体试剂盒的选择和染色结果判读的主观性等诸多因素影响；②肿瘤异质性导致免疫组化法无法避免出现假阴性的结果；③检测所需组织样本要通过手术获取，取材繁琐且对患者影响较大；④部分患者无法提供组织样本或组织样本无法满足检测的基本要求。此外，定量RT-PCR主要用于CD55 mRNA表达水平的检测，具有灵敏度高、序列特异性强等优点；但是，定量RT-PCR过程对环境和操作的要求高，稍有不慎，就可能造成污染，导致假阳性结果的产生。

基于此，有必要开发出一种灵敏度高、特异性强、准确率高的CD55基因检测试剂盒。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种灵敏度高、特异性强、准确率高的CD55基因表达检测试剂盒，可用于检测生物样本中CD55基因的表达水平，提供临床相关辅助信息。

具体技术方案如下：

一种CD55基因表达检测试剂盒，包括针对CD55基因mRNA的茎环状捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括扩增探针和末端修饰有树状荧光基团的标记探针；其中，

(1)茎环状捕获探针：所述捕获探针为茎环状，用于连接CD55基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：茎部结构序列，能与CD55基因mRNA结合的特异性P1序列、间隔臂序列、P2序列；所述茎部结构序列可与P2序列3’端的碱基互补形成茎环结构；所述P2序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P4和CD55基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列；所述针对CD55基因mRNA的茎环状捕获探针中，特异性P1序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10中的5条或5条以上，茎部结构序列为SEQ ID NO.21，P2序列为SEQ ID NO.23；