[发明专利]一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜及其制备方法

权利要求书

1.一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)制取间充质干细胞培养上清液：使用粘连蛋白对细胞培养容器进行预处理，预处理后将粘连蛋白吸走，然后将驯化后的P1-P30代间充质干细胞在培养容器进行铺板且在第二天换液，第三天开始收取培养上清，过0.22μm滤膜后备用；

(2)制备基底液：将包括按质量比计的1-10％甘油、1-4％丁二醇、1-5％1,2-戊二醇、0.1-5％双丙甘醇、0.5-5％双甘油、0.5-4％蔗糖、0.5-3％PCA钠、0.01-1％PEG-60氢化蓖麻油、0.1-0.3％黄原胶和余量水的A组分经高速混合器加热到80-85℃，进行高速混合搅拌,高速混合器冷却到40℃以下时投入包括按质量比计的0.1-0.5％柠檬酸、0.1-0.5％柠檬酸钠和余量水的B组分高速混合搅拌，然后投入包括按质量比计的0.1-0.5％苯氧乙醇、0.1-1％甜菜碱、0.1-1％羟乙基纤维素、0.0001-1％肌肽、0.0001-0.1％硫辛酸、0.0001-1％白藜芦醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％积雪草提取物、0.01-1％水解蚕丝、0.0001-1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水的C组分进行高速混合搅拌；

(3)待高速混合器冷却到室温后，在步骤(2)的基底液中加入步骤(1)中的间充质干细胞培养上清液，进行高速混合搅拌。

2.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述间充质干细胞的驯化方法为以无血清培养基培养。

3.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述含有间充质干细胞的组织来源于健康者的脐带、胎盘、脂肪、骨髓或牙髓。

4.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述含有间充质干细胞的提取方法为用磷酸盐缓冲液洗去血细胞后，剪碎成大约1mm³的细小组织块后，加入2mL的1mg/mL的I型胶原酶消化液处理后，转移至15mL离心管中，37℃恒温摇床振荡消化30min，没有大的组织块后，加入等体积间充质干细胞完全培养基终止消化，1000rpm离心8min沉降细胞，弃去上清液及悬浮脂肪组织，加入脂肪间充质干细胞完全培养基，接种于细胞培养皿中，置于37℃的CO₂培养箱中培养，48小时后首次换液，培养4-7天后，更换新的完全培养基再培养2-3天，达到80-90％融合时，弃掉培养液，先用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，然后加入无血清培养液继续培养48小时，进行传代培养，即得可用无血清培养基培养的间充质干细胞。

5.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.0-7.2。

6.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述在培养容器进行铺板的间充质干细胞的密度大于1.8×10⁴/cm²。

7.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述使用粘连蛋白进行预处理的条件为在37℃处理1小时。

8.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述粘连蛋白采用iMatrix-511粘连蛋白。

9.一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜，其特征在于其面膜液包括：由按质量比计的0.1-5％间充质干细胞培养上清液和95-99.9％的基底液组成。

10.根据权利要求7所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜，其特征在于：所述基底液包括A组分、B组分、C组分：

所述A组分包括按质量百分比计的1-10％甘油、1-4％丁二醇、1-5％1,2-戊二醇、0.1-5％双丙甘醇、0.5-5％双甘油、0.5-4％蔗糖、0.5-3％PCA钠、0.01-1％PEG-60氢化蓖麻油、0.1-0.3％黄原胶和余量水；

所述B组分包括按质量百分比计的0.1-0.5％柠檬酸、0.1-0.5％柠檬酸钠和余量水；

所述C组分包括按质量百分比计的0.1-0.5％苯氧乙醇、0.1-1％甜菜碱、0.1-1％羟乙基纤维素、0.0001-1％肌肽、0.0001-0.1％硫辛酸、0.0001-1％白藜芦醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％积雪草提取物、0.01-1％水解蚕丝、0.0001-1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水。