[发明专利]一种具有免疫球蛋白结合能力的融合蛋白

说明书

本发明公开一种具有免疫球蛋白结合能力的融合蛋白。本发明公开的融合蛋白包括依次连接的Protein L的B1结构域、Protein A的D结构域及C结构域和Protein G的G3结构域，Protein L的B1结构域和Protein A的D结构域通过SEQ ID No.6‑11任一所示的短肽连接，Protein A的D结构域和C结构域通过SEQ ID No.4连接，Protein A的C结构域和Protein G的G3结构域通过短肽VSM连接。本发明融合蛋白对于不同种属、亚型的免疫球蛋白均具有较好亲和力和较快的结合效率，对pH的耐受性更宽，应用前景和应用范围更为广阔。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域。更具体地，涉及一种具有免疫球蛋白结合能力的融合蛋白。

背景技术

在长期的进化过程中，一些细菌表面的蛋白可以特异性的同多种哺乳动物免疫球蛋白相结合，如金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcus aureus protein A)、链球菌蛋白G(Streptococcal protein G)和大消化链球菌表面蛋白L(Peptostreptococcus magnusprotein L)等，形成细菌重要的致病因子。根据这些蛋白的特异性结合免疫球蛋白的特性，目前这些蛋白已经广泛应用于免疫球蛋白的纯化分离领域。

Protein A为金黄色葡萄球菌细胞壁的免疫球蛋白结合蛋白，它包含5个与免疫球蛋白G(IgG)特异性结构的串联的结构域，分别命名为E，D，A，B，C。Protein A除可以特异性的同IgG的Fc区域结合，还可以同IgG的Fab区域结合。Protein G为链球菌细胞壁的免疫球蛋白结合蛋白，它包含3个与IgG特异性结构的串联的结构域，分别命名为B1，B2，B3。同样，Protein G也具有部分结合Fab的CH1结构域的特性。Protein L为大消化链球菌细胞壁的免疫球蛋白结合蛋白，可以特异性结合IgG的Fab区域。Protein L包含B1，B2，B3，B4，B5共5个串联结构域，单一的结构域可以通过两个区域同时结合Fab中VL部分。

由于Protein A、G或L各自对IgG的识别区域不同，对于不同种属及免疫球蛋白亚型的亲和力差异较大，无法利用一种蛋白同时满足所有种属及免疫球蛋白亚型的分离或者纯化。基于Protein A、G或L各自特性及互补性，人们不断尝试不同的分子或结构域组合的融合蛋白，例如将Protein A与Protein G融合表达构建Protein AG(Eliasson,M.,Olsson,A.,Palmcrantz,E.,Wiberg,K.,M.,Guss,B.,Lindberg,M.Uhle′n,M.ChimericIgG-binding receptors engineered from staphylococcal protein A andstreptococcal protein G.1988.J.Biol.Chem.263,4323-4327.)，将Protein G与ProteinL融合表达构建Protein GL(Kihlberg,B.M.,U.,Kastern,W.L.ProteinLG:a hybrid molecule with unique immunoglobulin bindingproperties.1992.J.Biol.Chem.267,25 583-25 588.)，将Protein L与Protein A融合表达构建Protein LA(Svensson HG,Hoogenboom HR,U.Protein LA,a novel hybridprotein with unique single-chain Fv antibody-and Fab-bindingproperties.1998.Eur J Biochem.258(2):890-6.)，这些融合蛋白相比于单个蛋白，可以有效提升对各类型免疫球蛋白的亲和力，应用面更广。之后人们不断尝试进一步提升Protein A、G或L融合蛋白对于各类型免疫球蛋白和蛋白自身的稳定性。但目前，人们构建串联的融合蛋白都是选择单个的结构域或者完整蛋白进行直接连接，不同结构域之间存在空间位阻导致与IgG结合力受到影响。