[发明专利]一种高产聚苹果酸的菌株及提高聚苹果酸产量的方法

权利要求书

1.一种利用高产聚苹果酸的菌株提高聚苹果酸产量的方法，其特征在于包括步骤：(1)菌种活化、(2)种子培养、(3)发酵培养、(4)聚苹果酸提取；其中步骤(3)发酵培养的过程为：将种子培养液以8％-10％(V/V)的接种量接种到含有玉米浆的发酵培养基中发酵培养，所述发酵培养基各组分及含量为：蔗糖180g/L，蛋白胨35g/L，磷酸二氢钾0.1g/L，硝酸钠2g/L，硫酸镁0.3g/L，氯化钾0.5g/L，硫酸锰0.05g/L，碳酸钙20g/L，6.00g/L玉米浆，溶剂为水，121℃灭菌20min；所述菌株的分类命名为产黑色素短梗霉(Aureobasidium melanogenum)BCSW-001，已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2019年11月22日，保藏编号为：CGMCC NO.18996。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)菌种活化过程为：将保藏编号为CGMCC NO.18996产黑色素短梗霉(Aureobasidium melanogenum)转接至斜面培养基中活化；菌种活化条件为：在25℃下恒温培养3-5d；所述斜面培养基各组分及含量如下：20％土豆，2％葡萄糖，2％琼脂粉，121℃灭菌20min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)种子培养过程为：选取生长良好的斜面种子用无菌生理盐水洗下孢子，制备孢子悬浮液，将孢子悬浮液转接种到种子培养基中培养，在温度为22～28℃、转速为180～250rpm的条件下培养38～50小时，制得种子培养液；所述种子培养基各组分及含量如下：蔗糖60～150g/L，酵母膏2～5g/L，丁二酸1～3g/L，硫酸铵0.5～1.5g/L，碳酸钾0.2～0.6g/L，磷酸二氢钾0.08～0.12g/L，硫酸镁0.08～0.12g/L，硫酸锌0.02～0.08g/L，玉米浆1mL/L，碳酸钙10～30g/L，溶剂为水，121℃灭菌20min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(4)聚苹果酸提取过程为：将步骤(3)所得的发酵液离心后取上清液，加入硫酸水解。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，将产黑色素短梗霉的孢子悬浮液按5％(V/V)接种量接种到种子培养基中，在温度为25℃、转速为200rpm条件下培养40h；所述种子培养基各组分及含量为：蔗糖140g/L，酵母膏3g/L，丁二酸2g/L，硫酸铵1g/L，碳酸钾0.4g/L，磷酸二氢钾0.1g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸锌0.05g/L，玉米浆1mL/L，碳酸钙20g/L，溶剂为水。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)的发酵培养为摇瓶发酵培养或发酵罐发酵培养；摇瓶发酵培养时，发酵培养条件为：在温度为22～28℃、转速为180～250rpm的条件下培养90～150h；发酵罐发酵培养时，发酵培养条件为：在温度为22～28℃、转速为300～800rpm、通气比1:0.8～1:1.8条件下培养72～150h。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：摇瓶发酵培养时,发酵在温度25℃、转速为200rpm条件下培养144h；发酵罐发酵培养时，发酵在温度为25℃、转速为600rpm、通气比1:1.6条件下培养144h。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤(4)中，收集步骤(3)的发酵液，将发酵液在15000rpm条件下离心10min后取上清2ml，加浓度为2mol/L的硫酸2mL，然后在110℃烘箱中水解11h。