[发明专利]一种荧光乳胶微球与蛋白的偶联方法

说明书

本发明实施例公开了一种荧光乳胶微球与蛋白的偶联方法，包括如下步骤：将荧光乳胶微球进行活化处理、重悬，得到荧光乳胶微球溶液；采用甘氨酸溶液稀释蛋白，然后加入到荧光乳胶微球溶液中，超声反应，之后旋转混匀反应，甘氨酸和蛋白进行共标记；待反应结束后，向反应液中添加封闭液进行封闭、离心，收集沉淀物；将沉淀物置于甘氨酸溶液中、超声分散，即得荧光乳胶微球与蛋白偶联的复合物；该偶联方法能够提高荧光乳胶微球与蛋白的偶联效率以及偶联强度，使得微球表面与蛋白的结合位点充分结合，能够有效提高制备复合物的稳定性，并避免凝集现象的发生；此外，还能够提高荧光检测的灵敏度。

技术领域

本发明实施例涉及生物分析技术领域，具体涉及一种荧光乳胶微球与蛋白的偶联方法。

背景技术

对某些抗原或特异性蛋白进行检测时,通常会应用到免疫标记技术。免疫标记技术是将既容易测定又具有高敏感性的物质标记到特异性抗原或者抗体蛋白上,通过这些标记物的增强放大作用来显示反应体系中抗原或抗体的性质和含量的技术。

目前常用的标记物包括胶体金、乳胶、荧光素、荧光微球、酶和放射性核素等。然而，现有的荧光微球标记抗体过程中，由于标记方法不合理，荧光微球与抗体偶联效率和偶联强度较低导致检测荧光值偏低。

发明内容

为此，本发明实施例提供一种荧光乳胶微球与蛋白的偶联方法，以解决现有技术中荧光微球与蛋白偶联效率和偶联强度较低，导致检测卡荧光值偏低问题。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

根据本发明实施例的第一方面提供一种荧光乳胶微球与蛋白的偶联方法，所述偶联方法包括如下步骤：

(a)将荧光乳胶微球进行活化处理、重悬，得到荧光乳胶微球溶液；

(b)采用甘氨酸溶液稀释蛋白，然后加入到荧光乳胶微球溶液中，超声条反应，之后旋转混匀反应，甘氨酸和蛋白进行共标记；

(c)待反应结束后，向反应液中添加封闭液进行封闭、离心，收集沉淀物；

(d)将沉淀物置于甘氨酸溶液中、超声分散，即得荧光乳胶微球与蛋白偶联的复合物；

本发明上述偶联方法，通过对荧光乳胶微球进行活化处理，以及采用特定的缓冲液以及超声、旋转反应处理，能够显著提高荧光乳胶微球的活化效果以及促进荧光乳胶微球与蛋白充分接触，进而提高荧光乳胶微球与蛋白的偶联效率以及偶联强度，使得微球表面与蛋白的结合位点充分结合，能够有效提高制备复合物的稳定性，并避免凝集现象的发生；此外，还能够提高荧光检测的灵敏度。

进一步地，所述步骤(a)中，超声反应时间为8-12min。

进一步地，所述蛋白为心肌肌钙蛋白I单克隆抗体。

本发明通过对蛋白种类的限定，能够更好地提高荧光乳胶微球与蛋白的偶联效率和偶联强度，提高免疫荧光的检测效果。

进一步地，所述步骤(b)中，荧光乳胶微球溶液与含有蛋白的甘氨酸溶液的体积比为1∶(3-5)。

进一步地，所述甘氨酸溶液浓度为0.01-0.2mM。

进一步地，所述蛋白的添加至终浓度为20-200ug/ml。

进一步地，所述活化处理为：将荧光乳胶微球进行稀释，随后依次向稀释后的荧光乳胶微球溶液中添加含有NHS的乙醇溶液和含有EDC的乙醇溶液、混匀、常温反应、超声处理、离心，收集活化后的荧光乳胶微球。