[发明专利]一种生产光学纯冰片的方法及工程菌有效

专利信息
申请号: 201911352887.X 申请日: 2019-12-25
公开(公告)号: CN113025663B 公开(公告)日: 2022-12-13
发明(设计)人: 蔡宇杰;胡正红;李一想;梁维悦;邓华祥;丁彦蕊;白亚军;郑晓晖 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12P7/02 分类号: C12P7/02;C12N1/21;C12R1/19
代理公司: 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 代理人: 彭素琴
地址: 214000 江苏*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 生产 光学 冰片 方法 工程
【权利要求书】:

1.一种生产光学纯冰片的方法,其特征在于,所述方法是采用酶催化转化底物生产光学纯冰片;采用的底物为右旋樟脑或左旋樟脑;所述酶为樟脑还原酶和将NAD(P)还成NAD(P)H的酶;

以左旋樟脑为底物时,采用的樟脑还原酶的NCBI编号为:WP_018661094.1、WP_024464202.1、WP_020072635.1、WP_029478658.1、WP_016250641.1、WP_026977357.1、WP_027828367.1、WP_029153423.1、WP_007735622.1、WP_020970823.1、WP_014986314.1或WP_028687497.1;

以右旋樟脑为底物时,采用的樟脑还原酶的NCBI编号为:WP_026399553.1、WP_027675178.1、WP_026674650.1、WP_035212425.1、WP_063628934.1、WP_025748486.1、WP_009897780.1、WP_003681755.1、WP_029144880.1、WP_005565287.1、WP_063027861.1或WP_018381069.1。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述酶催化为以下任意一种:全细胞转化、破胞液生产、粗酶转化、纯酶转化。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述全细胞转化的体系为:细胞湿重1-200g/L,樟脑1-200g/L,葡萄糖1-250g/L,NAD或NADP 0-1g/L,乙醇0-100g/L,pH 4.0-9.0,于15-70℃反应,时间1-48小时。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述可将NAD(P)还成NAD(P)H的酶,包括甲酸脱氢酶、葡萄糖脱氢酶、亚磷酸脱氢酶。

5.一种生产光学纯冰片的重组菌,其特征在于,所述重组菌同时表达樟脑还原酶和可将NAD(P)还成NAD(P)H的酶;以左旋樟脑为底物生产光学纯冰片时,采用的樟脑还原酶的NCBI编号为:WP_018661094.1、WP_024464202.1、WP_020072635.1、WP_029478658.1、WP_016250641.1、WP_026977357.1、WP_027828367.1、WP_029153423.1、WP_007735622.1、WP_020970823.1、WP_014986314.1或WP_028687497.1;

以右旋樟脑为底物生产光学纯冰片时,采用的樟脑还原酶的NCBI编号为:WP_026399553.1、WP_027675178.1、WP_026674650.1、WP_035212425.1、WP_063628934.1、WP_025748486.1、WP_009897780.1、WP_003681755.1、WP_029144880.1、WP_005565287.1、WP_063027861.1或WP_018381069.1;

所述可将NAD(P)还成NAD(P)H的酶,包括甲酸脱氢酶、葡萄糖脱氢酶、亚磷酸脱氢酶。

6.根据权利要求5所述的重组菌,其特征在于,所述重组菌为重组大肠杆菌。

7.根据权利要求6所述的重组菌,其特征在于,所述重组菌重组表达时所用质粒包括:pETDuet-1、pACYCDue-1、pCOLADuet-1、pRSFDuet-1、pET28a。

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