[发明专利]高通量单细胞染色质可及性的测序方法

权利要求书

1.一种高通量单细胞染色质可及性的测序方法，其特征在于包括：

以转座酶孵育处理细胞核，使其中的染色质开放区带有第一接头序列，从而获得转座后细胞核；

以微流控芯片将转座后细胞核及细胞标签包装于油包水反应液滴内，所述油包水反应液滴包括细胞核液相和包裹所述细胞核液相的油相，所述细胞核液相包含单细胞核和单个细胞标签，所述细胞标签包括可变形微珠和连接在可变形微珠上的带标签的引物；

对所述油包水反应液滴进行物理和/或化学处理，使其中带标签的引物被从可变形微珠上释放；

孵育所述油包水反应液滴，使所述带标签的引物捕获其中带有第一接头序列的DNA；

对所述油包水反应液滴进行破乳处理，再提取、扩增其中的DNA，并在DNA两端添加测序接头，构建形成测序文库，其后进行测序分析。

2.根据权利要求1所述的测序方法，其特征在于包括：将细胞裂解获得细胞核，再以转座酶孵育所述细胞核，使得每个细胞核的染色质开放区带上第一接头序列，所述第一接头序列能够与所述带标签的引物中的第二接头序列特异性结合，从而使得所述带标签的引物能够捕捉带有第一接头序列的DNA。

3.根据权利要求1所述的测序方法，其特征在于包括：采用物理方式对所述油包水反应液滴进行破乳处理；优选的，所述物理方式包括超声处理方式。

4.根据权利要求2所述的测序方法，其特征在于还包括：

对所述油包水反应液滴进行物理和/或化学处理后，再在72℃-55℃孵育，使所述带标签的引物捕捉带有第一接头序列的DNA；以及

孵育所述油包水反应液滴，对其中的DNA进行连接，修复缺口。

5.根据权利要求1所述的测序方法，其特征在于：所述第一接头序列、第二接头序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示；和/或，所述带标签的引物的总长度为50nt-200nt；和/或，所述标签包括作为条形码的长度为5-24nt的碱基序列；优选的，所述条形码包含3段恒定碱基序列。

6.根据权利要求1所述的测序方法，其特征在于：以紫外光照射所述油包水反应液滴，从而使其中带标签的引物被从可变形微珠上释放。

7.根据权利要求1所述的测序方法，其特征在于：所述可变形微珠包括凝胶微珠，优选为多孔聚丙烯酰胺微珠；和/或，所述可变形微珠的直径为10μM-200μM。

8.根据权利要求1所述的测序方法，其特征在于：所述转座酶包括Tn5转座酶。

9.根据权利要求1所述的测序方法，其特征在于具体包括：

将转座后细胞核、细胞标签分别制成细胞核悬液、细胞标签悬液；

提供微流控芯片，其包括细胞微流道、细胞隔离介质微流道、细胞标签微流道和单细胞样本收集口；

将细胞核悬液、细胞标签悬液分别注入微流控芯片，并使细胞核悬液、细胞标签悬液在分别流经细胞微流道、细胞标签微流道后相互混合形成细胞核载液；

将作为细胞隔离介质的油注入微流控芯片，且使细胞隔离介质在细胞隔离介质微流道内流动时与细胞核载液接触，并对细胞核载液进行剪切、包裹，从而形成包含单细胞核和单个细胞标签的油包水反应液滴；

以及，从单细胞样本收集口处收集所述油包水反应液滴。