[发明专利]7β-羟基类固醇脱氢酶筛选方法、编码基因及应用在审
| 申请号： | 201911354642.0 | 申请日： | 2019-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN113025587A | 公开（公告）日： | 2021-06-25 |
| 发明（设计）人： | 阮礼涛;钟胡军;丁扬阳;陈茜;顾虹 | 申请（专利权）人： | 上海奥博生物医药技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12P33/06;G16B40/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201203 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 羟基 类固醇 脱氢酶 筛选 方法 编码 基因 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种7β-羟基类固醇脱氢酶基因挖掘筛选方法，其特征在于所述方法为：以已解析蛋白晶体结构的7β-羟基类固醇脱氢酶作为筛选模板，在NCBI及PDB数据库中进行同源比对，进一步筛选含催化三联体S-Y-K及G-X-X-X-G-X-G特征性辅酶结合位点的序列，通过同源建模，对比三维蛋白模型C-端特征性双α-螺旋结构，筛选获得新型7β-羟基类固醇脱氢酶。
2.如权利要求1所述的方法筛选获得的7β-羟基类固醇脱氢酶，分别来源于Libanicoccus massiliensis，Clostridium sp.CL-2，Clostridium butyricum，其特征在于所述重组7β-羟基类固醇脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1-3所示。
3.如权利要求2所述的7β-羟基类固醇脱氢酶生物催化制备熊去氧胆酸及其中间体中的应用，其特征在于所述的应用为：于缓冲体系中加入葡萄糖脱氢酶、葡萄糖和NAD(P)-，以7β-羟基类固醇脱氢酶或含有该酶的重组细胞作为生物催化剂，立体选择性催化熊去氧胆酸中间体C-7羰基生成7β-羟基，制备光学纯熊去氧胆酸及中间体。
4.如权利要求3所述的熊去氧胆酸及中间体的酶法制备方法，其特征在于所述熊去氧胆酸及中间体的结构式如下：
R1为氢、羰基或羟基，R2为氢、羰基或羟基。
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