[发明专利]缓冲液及其应用

权利要求书

1.一种缓冲液，其特征在于，包括：

33-66mM Tris-醋酸缓冲液，2-15mM二价阳离子、37.5-62.5mM一价阳离子、0.5-10mM二硫苏糖醇(DTT)、5-15％PEG4000-8000和0.5-2mM ATP，pH值为7-9，

所述一价阳离子为Na⁺。

2.根据权利要求1所述的缓冲液，其特征在于，所述Tris-醋酸缓冲液的浓度为33-40mM。

3.根据权利要求1所述的缓冲液，其特征在于，所述二价阳离子为Mg²⁺或Mn²⁺，优选地，为Mg²⁺。

4.根据权利要求1所述的缓冲液，其特征在于，所述二硫苏糖醇的浓度为0.5-5mM。

5.根据权利要求1所述的缓冲液，其特征在于，所述PEG4000-8000的浓度为7-12％。

6.根据权利要求5所述的缓冲液，其特征在于，所述PEG4000-8000的浓度为9-11％。

7.根据权利要求6所述的缓冲液，其特征在于，所述PEG4000-8000的浓度为10％。

8.根据权利要求5所述的缓冲液，其特征在于，所述PEG4000-8000为PEG4000和/或PEG6000。

9.根据权利要求1所述的缓冲液，其特征在于，所述pH值为8。

10.根据权利要求1所述的缓冲液，其特征在于，所述缓冲液包括：33-66mM Tris-醋酸缓冲液、5-10mM Mg²⁺、45-55mM一价阳离子、0.5-10mM二硫苏糖醇、5-15％PEG6000和0.5-2mMATP，pH值为7-9。

11.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-10任一项所述的缓冲液。

12.权利要求1-10任一项所述的缓冲液在构建核酸文库中用于接头连接缓冲液。

13.一种构建核酸文库的方法，其特征在于，将预处理后的核酸与反应体系混合进行接头连接反应，其中，所述反应体系含有权利要求1-10任一项所述的缓冲液，且所述连接反应的时间为不低于10分钟，温度为16-37摄氏度。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述连接反应的时间为10分钟至16小时，温度为20-30摄氏度。

15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述连接反应的连接酶为T4 DNA连接酶。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述T4 DNA连接酶的浓度为4-6U。