[发明专利]一种通过干扰UCH-L3表达抑制牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法

说明书

本发明涉及一种通过干扰UCH‑L3表达抑制牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法，所述方法是通过干扰UCH‑L3表达来实现抑制牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化，其中，所述UCH‑L3的基因组碱基序列为：SEQ NO.1。本发明方法利用改变UCH‑L3表达对牛肌卫星细胞的成肌分化过程进行调控，可以为肌肉发育分化的去泛素化酶研究提供启示，并为肌肉发育分化及损伤修复的临床研究及诊治提供新的思路和参考。

技术领域

本发明属于生物、细胞、组织工程技术领域，尤其是一种通过干扰UCH-L3表达抑制牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法。

背景技术

骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cell)是骨骼肌中一种附着于肌纤维表面的扁平、有突起的细胞，通常以静息状态存在于肌纤维肌膜与基底膜之间，在一定的条件下可以被激活，肌卫星细胞可增殖、分化、融合成为成熟的肌管或肌纤维，肌卫星细胞在动物出生后肌肉的生长发育和再生过程中发挥着十分重要的作用。肌卫星细胞的体外成肌分化过程很好地模拟了体内的肌肉发育过程，是研究细胞分化和肌肉发育的良好细胞模型。肌卫星细胞的激活、增殖与成肌分化过程受多种因素的调控，了解骨骼肌卫星细胞的成肌分化调控模式，可以增加人为控制肌细胞形成的可能性。

肌肉的分化和生长发育过程是内在遗传、表观遗传和外在的各种信号互作的结果，骨骼肌发育分化过程涉及多基因的表达、信号途径及网络式调控，过程极其复杂，其中，去泛素化酶的调控作用受到越来越多的重视。泛素的主要功能是标记需要被分解掉的蛋白质，使其被水解。真核细胞中80％以上的细胞内蛋白质的降解由泛素-蛋白酶体完成。泛素-蛋白酶体介导的蛋白降解主要包括泛素化、蛋白酶体降解、去泛素化3个过程。去泛素化是指已经泛素化的蛋白质在去泛素化酶的作用下水解泛素分子。泛素羧基末端水解酶L3属于UCHs家族，可以将泛素分子从底物上水解下来，使泛素能够循环利用。UCH-L3定位于小鼠的第14号染色体，主要位于造血组织中，分子质量为26kD。已有研究表明，UCH-L3可以与Smad1相互作用，显著降低多聚泛素化的Smad1，可以通过微调Smad1信号的稳定来加强成骨细胞的分化。目前，在牛肌卫星细胞成肌分化中UCH-L3的相关研究鲜见报道。

通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术环境胁迫问题的不足之处，提供一种通过干扰UCH-L3表达抑制牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法，该方法利用改变UCH-L3表达对牛肌卫星细胞的成肌分化过程进行调控，可以为肌肉发育分化的去泛素化酶研究提供启示，并为肌肉发育分化及损伤修复的临床研究及诊治提供新的思路和参考。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种通过干扰UCH-L3表达抑制牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的方法，所述方法是通过干扰UCH-L3表达来实现抑制牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化，其中，所述UCH-L3的基因组碱基序列为：SEQ NO.1。

而且，具体步骤如下：

根据UCH-L3碱基序列，设计合成出UCH-L3的si-RNA，以si-RNA转染牛骨骼肌卫星细胞，调低UCH-L3的表达水平，实现抑制牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化。

而且，所述si-RNA的基因序列为：SEQ NO.6至SEQ NO.10。

而且，所述干扰UCH-L3表达水平的方法包括：采用干扰UCH-L3表达的质粒、病毒载体及基因敲除的方法。

本发明取得的优点和积极效果为：

1、本发明方法利用改变UCH-L3表达对牛肌卫星细胞的成肌分化过程进行调控，可以为肌肉发育分化的去泛素化酶研究提供启示。