[发明专利]一种高效靶向纳米疫苗载体及其制备方法、靶向纳米疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种高效靶向纳米疫苗载体，按照以下步骤制备得到：

A)将对甲苯磺酰基和叔丁氧羰基双保护的精氨酸进行活化，再加入线性聚α-赖氨酸的水溶液进行反应，将反应后的溶液进行透析和冻干，得到冻干产物；

所述线性聚α-赖氨酸与对甲苯磺酰基和叔丁氧羰基双保护的精氨酸的摩尔比为1:(10～100)；

B)将所述步骤A)中的冻干产物与三氟乙酸进行反应，加入无水乙醚沉降，真空干燥和透析后，得到阳离子聚合物；

C)将N,N'-二异丙基乙胺、活化后的甘露糖和所述步骤B)中的阳离子聚合物混合，进行反应，反应后的产物透析和冻干，得到高效靶向纳米疫苗载体；

所述甘露糖按照以下步骤进行活化：

将甘露糖加入氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后加入氯乙酸水溶液进行反应，然后加入盐酸，使反应后的甘露糖羧基化，最后加入1-乙基-3-(3-三甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑，进行活化，得到活化的甘露糖；

所述高效靶向纳米疫苗载体包括线性聚α-赖氨酸，所述线性聚α-赖氨酸上接枝有甘露糖和对甲苯磺酰基保护的精氨酸；

所述线性聚α-赖氨酸与对甲苯磺酰基保护的精氨酸的摩尔比为1:(10～100)；

所述线性聚α-赖氨酸与甘露糖的摩尔比为1:(1～30)。

2.根据权利要求1所述的高效靶向纳米疫苗载体，其特征在于，所述线性聚α-赖氨酸的数均分子量为3000～30000。

3.根据权利要求1所述的高效靶向纳米疫苗载体，其特征在于，所述对甲苯磺酰基和叔丁氧羰基双保护的精氨酸按照以下步骤进行活化：

将对甲苯磺酰基和叔丁氧羰基双保护的精氨酸溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-3-(3-三甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑，进行活化；

得到的对甲苯磺酰基和叔丁氧羰基双保护的精氨酸的N,N-二甲基甲酰胺溶液的质量浓度为0.02～0.5mg/mL。

4.根据权利要求1所述的高效靶向纳米疫苗载体，其特征在于，所述步骤A)反应的温度为20～37℃；所述步骤A)反应的时间为24～96小时；

所述步骤A)中透析的时间为2～5天；所述步骤A)中冻干的温度为-30～-80℃。

5.根据权利要求1所述的高效靶向纳米疫苗载体，其特征在于，所述步骤B)中冻干产物的质量与三氟乙酸的物质的量之比为1g：(1～5)mL；

所述步骤B)中的反应的温度为20～35℃，所述步骤B)中反应的时间为0.5～24小时。

6.根据权利要求1所述的高效靶向纳米疫苗载体，其特征在于，所述步骤C)反应的温度为20～37℃；所述步骤C)反应的时间为12～96小时；

所述步骤C)中透析的时间为2～5天；所述步骤C)中冻干的温度为-30～-80℃。

7.根据权利要求1所述的高效靶向纳米疫苗载体，其特征在于，所述甘露糖的活化步骤具体为：

将甘露糖加入氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后加入氯乙酸水溶液，在20～90℃下反应2～48小时，然后加入盐酸，调整pH值为1.5～4，使反应后的甘露糖羧基化，最后加入1-乙基-3-(3-三甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑，活化10～60min，得到活化的甘露糖。

8.一种靶向纳米疫苗，包括载体和担载在所述载体上的抗原和佐剂；

所述载体为权利要求1～7任意一项所述的高效靶向纳米疫苗载体；所述抗原和佐剂均带负电；

所述抗原为蛋白抗原或多肽抗原；所述佐剂核酸类佐剂和/或STING信号通路激动剂，

所述载体、抗原和佐剂的质量比为(1～100)：(0.5～10)：1。

9.如权利要求8所述的靶向纳米疫苗的制备方法，包括以下步骤：

将载体、抗原和佐剂在水溶液中进行复合，得到靶向纳米疫苗；

所述载体的质量浓度为0.5～5mg/mL，所述抗原的质量浓度为0.2～5mg/mL，所述佐剂的质量浓度为0.05～2.5mg/mL；

所述复合的温度为15～30℃，所述复合的时间为10～30min。