[发明专利]人源化细胞因子IL15基因改造非人动物的构建方法及应用

权利要求书

1.一种人源化IL15基因改造非人动物的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包含用sgRNA分子和靶向载体将编码人IL15蛋白的核苷酸序列导入非人动物IL15基因的内源调控元件之后，所述的人源化IL15基因改造非人动物体内表达人IL15蛋白；所述的sgRNA分子靶向5’端的靶位点序列如SEQ ID NO：10所示，靶向3’端的靶位点序列SEQ ID NO：21所示；所述的靶向载体包含供体DNA序列，所述的供体DNA序列如SEQ ID NO：9所示，所述的靶向载体还包含与待改变的转换区5’端同源的DNA片段，即5’臂，所述5’臂核苷酸序列如SEQ IDNO：7所示，和，所述的靶向载体还包含与待改变的转换区3’端同源的DNA片段，即3’臂，所述3’臂核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示，所述的人源化IL15基因包含如SEQ ID NO：6所示的核苷酸片段；所述的非人动物是NOD-Prkdc^scid IL-2rg^null小鼠。

2.一种制备多基因修饰的人源化非人动物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)按照权利要求1所述的构建方法构建的非人动物；

b)将步骤(a)制备获得的非人动物与其他基因人源化动物交配、体外授精或直接进行基因编辑，并进行筛选，得到多基因修饰的人源化非人动物。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的其他基因人源化动物选自基因IL3、IL6、CSF1、CSF2或SIPRA经修饰的人源化动物。

4.一种荷瘤动物模型的制备方法，其特征在于，所述的动物模型制备方法包括通过权利要求1-3任一所述的方法制备的非人动物。

5.来源于权利要求1所述的构建方法构建的人源化IL15基因改造非人动物、权利要求2-3任一所述的方法获得的多基因修饰的人源化非人动物、权利要求4所述制备方法制备的荷瘤动物模型在需要涉及人类细胞的免疫过程的产品开发，制造人类抗体，或者作为药理学、免疫学、微生物学和医学基础研究的模型系统中的应用；或者，在生产和利用动物实验疾病模型，用于病原学研究中的应用；或者，在筛选、验证、评价或研究IL15基因功能、针对IL15靶位点的药物、人造血干细胞的形成、功能研究和/或构建疾病模型药效研究，免疫相关疾病药物以及抗肿瘤药物方面的应用，所述应用不是疾病的诊断或治疗方法。