[发明专利]miR-376b的应用及检测试剂盒

说明书

本发明公开了miR‑376b的应用及检测试剂盒。具体涉及检测miR‑376b的试剂在制备预测患有脓毒血症的人或鼠中急性肾损伤制剂中的应用。在脓毒血症急性肾损伤患者中，尿miR‑376b表达下调，血肌酐值或尿素氮值与尿miR‑376b表达均存在负相关性。提示miR‑376b表达下调可能与脓毒血症患者的急性肾损伤相关。本发明结果表明，miR‑376b可作为脓毒血症AKI诊断的生物标记物，具有早期诊断的优势和较高的敏感性及特异性。

技术领域

本发明属于脓毒血症患者急性肾损伤检测技术领域，具体涉及一种检测miR-376b的试剂在制备预测脓毒血症患者急性肾损伤制剂中的应用，以及检测试剂盒。

背景技术

急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)，亦称急性肾衰竭，是由多种原因引起的肾脏功能快速下降甚至丧失，导致机体不能及时将体内各种毒素和代谢产物排泄出去，进而使得各种有害物质或者体内的正常代谢产物在体内蓄积，引起机体内环境的紊乱和代谢异常，并出现全身各个系统的症状。在临床上，AKI主要由脓毒血症，缺血再灌注(IR)损伤和各种内源性以及外源性肾毒素物质引起。其中，脓毒血症占所有AKI病例的近一半。此外，据统计，脓毒血症的发病率也在不断上升。根据一项针对美国人群的回顾性分析，在22年间，脓毒血症诊断的年增长率为8.7％。肾脏对脓毒血症损伤极其敏感，而且脓毒血症AKI的死亡率高达70％，是脓毒血症致死的重要独立危险因素。但目前对脓毒血症AKI的发病机制的了解十分有限，临床上早期诊断困难。因此，找到一个能够早期诊断发现脓毒血症患者AKI的指标，具有重要的意义。

根据KDIGO指南，血清肌酐和尿量是AKI诊断和分期的金标准.然而，这两个指标也有很大的局限性。主要表现为血清肌酐和尿量易受多种因素的影响，如有效循环血容易不足或利尿剂的使用。因此，近年来，一些新型蛋白标志物也被应用于AKI的诊断，包括肾损伤分子-1(KIM-1)，中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)，金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP2)，胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)和胱抑素C。但是，在脓毒血症AKI的诊断中，这些指标仍然具有很大的局限性。如在没有AKI的情况下，脓毒血症本身也会引起NGAL的上调，诊断缺乏特异性。关键的是，脓毒血症AKI小管损伤轻微，这些蛋白质指标在尿液中并不会出现明显的上调。

MicroRNAs(miRNAs)是一类由21-25个核苷酸组成的小分子非编码RNAs，它们能够在细胞内调控相应靶基因的表达。通过定量检测血液和尿液中的microRNAs分子表达量，可协助诊断AKI，并实时监测病情的发展和转归。与传统生化指标相比，miRNAs在生物体液中非常稳定，不易降解，容易分析和量化。同时关键的是，基于Taqman的miRNAs检测是高度特异性的，因为它以碱基互补配对为原则，是基于核酸序列的。这些优点提示我们可以使用miRNAs作为AKI的诊断和判断疾病预后的分子指标。同时，基于PCR的扩增能够在少量体液中测量非常少量的miRNA，具有高度的诊断敏感性。这些优点提示我们可以使用miRNAs作为脓毒血症AKI的诊断和判断疾病预后的分子指标。

发明内容

本发明的第一个目的是提供miR-376b的应用，具体是检测miR-376b的试剂在制备预测患有脓毒血症的人或鼠中急性肾损伤制剂中的应用。该试剂用于预测或者诊断患有脓毒血症的人或鼠患急性肾损伤的风险。

上述的miR-376b序列分为人源性：aucauagaggaaaauccauguu或者鼠源性：aucauagaggaacauccacuu。

上述检测人源性miR-376b的试剂用于制备预测患有脓毒血症的人中急性肾损伤制剂。

上述检测鼠源性miR-376b的试剂用于制备预测患有脓毒血症的鼠中急性肾损伤制剂。

本发明基于首次发现miR-376b与脓毒血症患者中的急性肾损伤的关联性，进而获得miR-376b在脓毒血症患者急性肾损伤的相关检测产品制备中的新应用。对早期诊断、预测脓毒血症并急性肾损伤有重要意义。