[发明专利]一种慢病毒体外转染人造血干细胞的试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201911360362.0 | 申请日： | 2019-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN113025660A | 公开（公告）日： | 2021-06-25 |
| 发明（设计）人： | 董国艺;欧阳文杰;刘超;李静;顾颖;侯勇 | 申请（专利权）人： | 深圳华大生命科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/0789;C12N5/10 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 李小焦;彭家恩 |
| 地址： | 518083 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 体外 转染 人造 干细胞 试剂盒 方法 | ||
1.一种慢病毒体外转染人造血干细胞的试剂盒，其特征在于：包括用于动员造血干细胞体外预激活培养处理的细胞体外预激活培养体系，和用于慢病毒转染预激活后人造血干细胞步骤的慢病毒感染培养体系；
所述细胞体外预激活培养体系中含有浓度为100-300ng/mL的SCF、100-300ng/mL的Flt3L、10-500ng/mL的TPO和25-100ng/mL的IL3；
所述慢病毒感染培养体系中含有dmPGE2和Ploxamer407。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述细胞体外预激活培养体系中含有浓度为100ng/mL的SCF、100ng/mL的Flt3L、100ng/mL的TPO和25ng/mL的IL3；
所述慢病毒感染培养体系中含有浓度为10μmol/L的dmPGE2和100μg/mL的Ploxamer407。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述细胞体外预激活培养体系的基础培养基为SCGM培养基；
优选的，所述慢病毒感染培养体系的基础培养基为SCGM培养基。
4.一种用于动员造血干细胞体外预激活培养处理的细胞体外预激活培养体系，其特征在于：含有浓度为100-300ng/mL的SCF、100-300ng/mL的Flt3L、10-500ng/mL的TPO和25-100ng/mL的IL3。
5.根据权利要求4所述的细胞体外预激活培养体系，其特征在于：含有浓度为100ng/mL的SCF、100ng/mL的Flt3L、100ng/mL的TPO和25ng/mL的IL3；
优选的，所述细胞体外预激活培养体系的基础培养基为SCGM培养基。
6.一种用于慢病毒转染预激活后人造血干细胞步骤的慢病毒感染培养体系，其特征在于：含有dmPGE2和Ploxamer407。
7.根据权利要求6所述的慢病毒感染培养体系，其特征在于：含有浓度为10μmol/L的dmPGE2和100μg/mL的Ploxamer407；
优选的，所述慢病毒感染培养体系的基础培养基为SCGM培养基。
8.一种慢病毒体外转染人造血干细胞的方法，其特征在于：包括采用权利要求1-3任一项所述的试剂盒进行动员造血干细胞体外预激活培养处理和慢病毒转染预激活后人造血干细胞步骤。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：在慢病毒转染预激活后人造血干细胞步骤，还包括，通过离心的方式提高慢病毒感染造血干细胞的效率，即在将慢病毒与人造血干细胞混匀后，离心处理，然后再进行感染培养。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述离心处理的条件为400-1000g离心0.5-2h；优选的，离心条件为800g离心30mim。
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