[发明专利]产L-谷氨酰胺的重组大肠杆菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种用于谷氨酰胺合成的重组大肠杆菌，其特征在于：所述重组大肠杆菌与受体大肠杆菌相比，所述重组大肠杆菌中下述蛋白质的基因的表达量降低和/或所述蛋白质的含量降低和/或所述蛋白质的活性降低：

所述蛋白质为：

1）谷氨酰胺酶A；

2）谷氨酰胺酶B；

3）同时具备谷氨酰胺合成酶腺嘌呤转移酶活性和谷氨酰胺合成酶去腺苷化活性的双功能酶；

4）肉豆蔻酰载体蛋白依赖性酰基转移酶；

5）PII-1蛋白；

所述重组大肠杆菌与受体大肠杆菌相比，所述重组大肠杆菌中谷氨酰胺合成酶的基因表达量增加和/或所述谷氨酰胺合成酶的含量增加和/或所述谷氨酰胺合成酶的活性增加；

所述谷氨酰胺合成酶为SEQ ID No.1所示的DNA分子编码的蛋白质；

所述谷氨酰胺酶A为Genbank号为NC_000913.3的第511641-512573位所示的DNA分子编码的蛋白质；

所述谷氨酰胺酶B为Genbank号为NC_000913.3的第1612325-1613251位所示的DNA分子编码的蛋白质；

所述同时具备谷氨酰胺合成酶腺嘌呤转移酶活性和谷氨酰胺合成酶去腺苷化活性的双功能酶为Genbank号为NC_000913.3的第3196801-3199641位所示的DNA分子编码的蛋白质；

所述PII-1蛋白为Genbank号为NC_000913.3的第2687070-2687408位所示的DNA分子编码的蛋白质；

所述肉豆蔻酰载体蛋白依赖性酰基转移酶为Genbank号为NC_000913.3的第1939222-1940193位所示的DNA分子编码的蛋白质；

所述大肠杆菌为大肠杆菌K12。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于：所述大肠杆菌K12为大肠杆菌K12菌株BW25113。

3.权利要求1所述重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于：所述构建方法包括对受体大肠杆菌的基因型进行下述m1）- m6）全部的改造，所述受体大肠杆菌为大肠杆菌突变体或野生型大肠杆菌：

m1）将谷氨酰胺酶A的基因敲除；

m2）将谷氨酰胺酶B的基因敲除；

m3）将具备谷氨酰胺合成酶腺嘌呤转移酶活性和谷氨酰胺合成酶去腺苷化活性的双功能酶的基因敲除；

m4）将PII-1蛋白的基因敲除；

m5）将肉豆蔻酰载体蛋白依赖性酰基转移酶的基因敲除；

m6）导入谷氨酰胺合成酶的基因；

所述谷氨酰胺合成酶为SEQ ID No.1所示的DNA分子编码的蛋白质；

所述谷氨酰胺酶A为Genbank号为NC_000913.3的第511641-512573位所示的DNA分子编码的蛋白质；

所述谷氨酰胺酶B为Genbank号为NC_000913.3的第1612325-1613251位所示的DNA分子编码的蛋白质；

所述同时具备谷氨酰胺合成酶腺嘌呤转移酶活性和谷氨酰胺合成酶去腺苷化活性的双功能酶为Genbank号为NC_000913.3的第3196801-3199641位所示的DNA分子编码的蛋白质；

所述PII-1蛋白为Genbank号为NC_000913.3的第2687070-2687408位所示的DNA分子编码的蛋白质；

所述肉豆蔻酰载体蛋白依赖性酰基转移酶为Genbank号为NC_000913.3的第1939222-1940193位所示的DNA分子编码的蛋白质；

所述大肠杆菌为大肠杆菌K12。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：所述大肠杆菌K12为大肠杆菌K12菌株BW25113。

5.权利要求1或2所述的重组大肠杆菌在制备L-谷氨酰胺中的应用。

6.制备L-谷氨酰胺的方法，其特征在于：包括利用权利要求1或2所述的重组大肠杆菌催化L-谷氨酸或L-谷氨酸可溶性盐反应得到L-谷氨酰胺。