[发明专利]一种诺卡氏菌免疫增强剂在禽用疫苗制备中的应用

权利要求书

1.一种诺卡氏菌免疫增强剂，利用诺卡氏菌制备，其特征在于，制备方法如下：

将诺卡氏菌置于30L的发酵罐中培养48小时，高温高压灭活，即得；

发酵罐中培养基的配方为葡萄糖2％、酵母粉1％、胰蛋白胨2％、纯化水95％，pH7.0-7.2；

在发酵罐中的培养条件为：搅拌转速310r/min，通气量1:1.0、接种量8％、装液量为罐容积的65％、温度30℃。

2.如权利要求1所述的诺卡氏菌免疫增强剂，其特征在于，所述高温高压灭活的具体操作为121℃，101kPa，处理20min。

3.一种如权利要求1所述的诺卡氏菌免疫增强剂在制备禽用油乳剂灭活疫苗中的应用。

4.一种如权利要求3应用中所述的禽用油乳剂灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将诺卡氏菌佐剂进行定量，同时测定其类脂化合物、阿拉伯半乳糖及粘肽的含量，得定量的诺卡氏菌佐剂；

S2将步骤S1所得定量的诺卡氏菌佐剂按乳化配方添加至混合抗原水相中，搅拌均匀并进行常规乳化，得初始的禽用油乳剂灭活疫苗；

S3、将步骤S2所得初始的禽用油乳剂灭活疫苗经物理性状检测，安全性检测、效力试验检测及商品动物免疫检测，验证合格后，即得。

5.如权利要求4所述禽用油乳剂灭活疫苗的制备过程，其特征在于，所述步骤S1中诺卡氏菌佐剂的定量过程为：无菌移取2mL佐剂样本平分到2支1.5mL eppendorf管中，12000rpm/min高速离心5min，弃除上清液后，置于103℃干燥箱中充分干燥2小时，测定样本干物质重量。

6.如权利要求4所述禽用油乳剂灭活疫苗的制备过程，其特征在于，所述步骤S1中测得类脂化合物含量为17.3％、多糖含量47.2％，粘肽含量为35.5％。

7.如权利要求4所述禽用油乳剂灭活疫苗的制备过程，其特征在于，所述步骤S2的具体操作为：取适当量诺卡氏菌佐剂5mg添加入100mL抗原液中，加入5ml的TWEEN-80后混匀，制备成抗原水相；按照抗原水相：油相＝1:2比例，使用IKA T25乳化机，12000rpm高速乳化5min。

8.如权利要求4所述禽用油乳剂灭活疫苗的制备过程，其特征在于，所述步骤S2中的抗原包括禽流感H9亚型、新城疫、鸡传染性法氏囊、禽腺病毒、鸭疫李默氏杆菌、新型鸭呼肠孤。

9.如权利要求4所述禽用油乳剂灭活疫苗的制备过程，其特征在于，所述步骤S3中商品动物免疫检测是采用市购的商品鸡、鸭和鹅进行动物实验，模拟临床进行疫苗效果评估。