[发明专利]一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫荧光双染试剂盒有效
| 申请号： | 201911363146.1 | 申请日： | 2019-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN111089964B | 公开（公告）日： | 2022-04-12 |
| 发明（设计）人： | 徐丽红;李文成;孙康俊;黄宝福 | 申请（专利权）人： | 江苏美克医学技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/574 | 分类号： | G01N33/574;G01N33/577;G01N33/533 |
| 代理公司： | 上海盈盛知识产权代理事务所(普通合伙) 31294 | 代理人： | 孙佳胤 |
| 地址： | 211800 江苏省南京市浦口区高*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 宫颈癌 辅助 诊断 免疫 荧光 试剂盒 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫荧光双染试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括标记了葡聚糖的Ki67单克隆抗体和标记了葡聚糖的P16INK4A单克隆抗体组成的混合一抗工作液，DAPI染液；
葡聚糖标记单克隆抗体通过以下方法制备：
(1)将葡聚糖溶于磷酸盐缓冲溶液中，加入高碘酸钠进行氧化，避光30℃～37℃搅拌反应2-3小时后加入过量乙二醇终止；使用葡聚糖基质相同磷酸盐缓冲溶液进行透析过夜；
(2)检测所需抗体磷酸盐缓冲溶液透析过夜；
(3)将氧化葡聚糖和抗体混合反应后，加入适量氰基硼氢化钠避光反应时间为1.5-3小时，反应温度4℃-6℃；
(4)加入适量乙二胺进行胺化反应后使用硼氢化钠还原，磷酸盐缓冲溶液透析过夜；
所述Ki67单克隆抗体标记荧光素Pacific Green，所述P16INK4A单克隆抗体标记荧光素Pacific Orange。
2.根据权利要求1所述的一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫荧光双染试剂盒，其特征在于，标记荧光素时，使用磷酸盐缓冲液透析、纯化树脂柱纯化或者超滤离心管离心纯化中的一种来去除游离荧光素。
3.根据权利要求1所述的一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫荧光双染试剂盒，其特征在于，工作液包括PH值为7.2-7.8的磷酸盐缓冲液。
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