[发明专利]一种基于葡聚糖信号放大的p16INK4a

说明书

本发明提供一种基于葡聚糖信号放大的p16^INK4a化学发光试剂盒，所述试剂盒包括p16^INK4a校准品，p16^INK4a抗体磁珠，吖啶酯标记葡聚糖多聚p16^INK4a抗体，缓冲液，稀释缓冲液以及洗涤液。本发明提供的试剂盒采用化学发光检测技术，结合葡聚糖的信号放大吖啶酯的化学发光体系更有利于检测细胞样本中的p16^INK4a抗原含量，具有非常高的灵敏度，与现有的p16^INK4a化学发光检测相比抗体使用量更少，干扰更低，具有较大的临床推广价值。

技术领域

本发明涉及生物化学检测领域，尤其涉及一种基于葡聚糖信号放大的p16^INK4a化学发光试剂盒。

背景技术

p16^INK4a基因又叫MTS(multiple tumor suppressor 1)基因，是1994年美国冷泉港实验室Kamb等发现的新抗癌基因，这是一种细胞周期中的基本基因，直接参与细胞周期的调控，负调节细胞增殖及分裂，在人类50％肿瘤细胞株纯发现有纯合子缺失，突变，认为p16^INK4a是比p53更重要的一种新型抗癌基因。有人把它比作细胞周期中的刹车装置，一旦失灵则会导致细胞恶性增殖，导致恶性肿瘤发生。p16^INK4a基因已经在肺癌、乳腺癌、脑肿瘤、骨肿瘤、皮肤癌、膀胱癌、肾癌、卵巢癌和淋巴瘤、黑色素瘤中发现纯合子缺失以及无义、错义及移码突变，表明p16^INK4a基因以缺失、突变方式广泛参与肿瘤形成，检测p16^INK4a基因有无改变对判断患者肿瘤的易感性以及预测肿瘤的预后，具有十分重要的临床意义。

化学发光免疫分析(CLIA)是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析之后发展起来的一项免疫测定技术。

CLIA与其它传统的标记技术相比有以下优点：第一，检测过程无放射性辐射，不会对人体有危害；第二，拥有较高的灵敏度和较宽的线性范围；第三，一般采用自动化仪器进行操作，无需专业操作人员，排除人为操作干扰，稳定性好；第四，该方法学应用场景广，可检测不同分子大小的抗原、半抗原和抗体，又可以用于核酸探针的检测。目前国内大部分在使用进口厂家的试剂，如罗氏、雅培、贝克曼等。

现有p16^INK4a检测方法主要是免疫组织化学法，只能定性染色无法定量检测，ELISA检测试剂盒的定量分析受p16^INK4a在细胞内表达水平和样本为脱落细胞的影响，对检测的灵敏度要求极高，容易出现漏检，所以亟需一种具有高灵敏度的p16^INK4a检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种抗体使用量更少，干扰更低，且具有极高灵敏度的基于葡聚糖信号放大的p16^INK4a化学发光试剂盒。

为了实现上述目的，本发明提供了一种基于葡聚糖信号放大的p16^INK4a化学发光试剂盒，所述试剂盒包括p16^INK4a校准品，p16^INK4a抗体磁珠，吖啶酯标记葡聚糖多聚p16^INK4a抗体，缓冲液，稀释缓冲液以及洗涤液；

所述吖啶酯标记葡聚糖多聚p16^INK4a抗体的制备方法为活化后的吖啶酯与活化后的葡聚糖和p16INK4a抗体三者偶联，封闭，洗涤，保存。

具体包括：

(1)葡聚糖活化：将葡聚糖(DeX)溶于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，加入适量高碘酸钠(NaIO₄)进行氧化，用葡聚糖基质相同磷酸盐缓冲溶液进行透析过夜；