[发明专利]裙带菜提取多糖及其在制备α-葡萄糖苷酶活性抑制药物中的应用

说明书

本发明公开了一种裙带菜多糖及其在制备α‑葡萄糖苷酶活性抑制药物中的应用。本发明制备的两种多糖Up‑3和Up‑4，其特点分子量分别为78～282kDa和41～314kDa；Up‑3主要由葡萄糖醛酸，甘露糖和岩藻糖组成，Up‑4主要由鼠李糖，葡萄糖醛酸和岩藻糖组成；对α‑葡萄糖苷酶抑制活性IC₅₀值分别为113.40±3.02μg/mL和50.53±3.47μg/mL，且具有显著性抑制口服麦芽糖导致的血糖升高。这说明硫酸化多糖Up‑3和Up‑4通过抑制肠道内α‑葡萄糖苷酶活性，从而降低餐后血糖的水平，而达到降血糖效果。

技术领域

本发明涉及裙带菜来源的两种硫酸化多糖及在制备α-葡萄糖苷酶活性抑制药物中的应用。

背景技术

糖尿病是一种由胰岛素抵抗或胰岛素分泌不足导致高血糖的慢性代谢混乱近年来，在世界上糖尿病人数逐年增多。世界糖尿病人数已经到4.25亿并且这个数量估计在2040年达到4.62亿(IDF Diabetes Atlas)，其中WHO(2018)报道糖尿病病人约有90％被诊断为2型糖尿病。2型糖尿病主要表现为胰岛素分泌缺陷和胰岛素抵抗，发病前期由于肝脏葡萄糖生成增多和外周葡萄糖的摄取减少，最后导致高血糖。

α-葡萄糖苷酶是重要的消化酶，主要用于消化食物中的麦芽糖和蔗糖。α-葡萄糖苷酶位于小肠粘膜，通过与膜结合水解终端非还原1,4-糖苷键葡萄糖残基释放游离的α-葡萄糖苷酶，以调节肠道内葡萄糖浓度。α-葡萄糖苷酶抑制剂是用于治疗2型糖尿病的一类药物。

裙带菜(Undaria pinnatifida)是一种可食用褐藻。在韩国，中国和日本是备受喜爱的食物之一。硫酸化多糖是裙带菜中最主要的活性化合物之一。在近年来，从裙带菜中提取的硫酸化多糖的多种生物学活性被广泛研究，包括抗氧化，抗炎，抗癌和抗肥胖活性。然而，裙带菜来源硫酸化多糖在制备降血糖活性药物中的应用还未见报道。本发明发现裙带菜来源的两种硫酸化多糖在降血糖方面具有显著功效。

发明内容

为了寻找裙带菜中降血糖的活性物质，本发明从裙带菜分离纯化出两种裙带菜提取多糖，即硫酸化多糖，这两种硫酸化多糖对α-葡萄糖苷酶活性抑制效果比阿卡波糖要强，且具有显著性抑制口服麦芽糖导致的血糖升高，说明这两种多糖可以降低2型糖尿病患者餐后血糖水平。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种裙带菜提取多糖，所述多糖按如下方法制备：

(1)脱脂：将裙带菜粉末与体积浓度70～100％乙醇水溶液混合，煮沸浸提2～4h，过滤，滤饼干燥(优选50～70℃)，获得脱脂裙带菜粉；

(2)微波辅助热水提取：向步骤(1)脱脂裙带菜粉中加去离子水并静置(优选 20-30min)，在微波功率600-700W、温度70～80℃条件下微波浸提20～40min，离心，收集上清液；

(3)除海藻胶：将步骤(2)中的上清液浓缩5-10倍体积，获得浓缩液；向浓缩液中缓慢加入CaCl₂水溶液(优选质量浓度0.04g/ml)使CaCl₂终浓度为0.015～ 0.025g/ml，搅拌后静置不少于15min，离心，收集上清液；

(4)透析：将步骤(3)中的上清液浓缩2-5倍体积，获得浓缩液；将浓缩液在透析袋内室温透析24～48h，收集截留液；

(5)乙醇沉淀：步骤(4)截留液浓缩2-5倍体积，加入无水乙醇，在0～4℃下静置沉淀12～24h；离心，收集沉淀，烘干(优选50～70℃)，得到裙带菜粗多糖；