[发明专利]重组表达载体、重组减毒鼠伤寒沙门氏菌及其构建方法和应用

说明书

本发明涉及一种重组表达载体、重组减毒鼠伤寒沙门氏菌及其构建方法和应用。该重组表达载体包括编码由内皮唾液酸蛋白的单链抗体和Caspase‑3形成的重组蛋白的核苷酸序列。含有该重组表达载体的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在肿瘤内特异性聚集及胞内侵袭，实现特异性杀伤肿瘤细胞效果的同时降低其对机体正常细胞的损伤，抗肿瘤效果好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种重组表达载体、重组减毒鼠伤寒沙门氏菌及其构建方法和应用。

背景技术

靶向治疗是指抗肿瘤药物能特异性地与肿瘤细胞结合，从而对肿瘤细胞起到杀伤效果而对健康组织基本无影响的一种肿瘤治疗方式。靶向治疗是目前治疗肿瘤较为理想的模式，也代表肿瘤治疗的未来趋势。

目前靶向治疗药物主要分为单克隆抗体和抗体药物偶联物(Antibody DrugConjugates，ADC)两类。ADC药物由单克隆抗体和强效毒性药物(toxic drug)通过生物活性连接器(linker)偶联而成，是一种定点靶向肿瘤细胞的药物。

虽然目前ADC药物对靶点的有较准的识别性及非癌细胞不受影响性，但其抗肿瘤效果还有待提高。

发明内容

基于此，有必要提供一种抗肿瘤效果好的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。

一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌，由重组表达载体转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌得到，其中，所述重组表达载体包括编码由内皮唾液酸蛋白的单链抗体和Caspase-3形成的重组蛋白的核苷酸序列。

上述重组减毒鼠伤寒沙门氏菌利用重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在实体瘤中侵袭和聚集特性，并通过重组表达载体在减毒鼠伤寒沙门氏菌中表达内皮唾液酸蛋白的单链抗体和Caspase-3形成的重组蛋白，实现Caspase-3蛋白聚集在肿瘤内，并对肿瘤细胞进行特异性杀伤，避免了Caspase-3蛋白无法在肿瘤特异性聚集的问题，从而提高了上述重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的抗肿瘤效果。经验证，上述重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的抗肿瘤效果好。

在其中一个实施例中，所述编码重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌，由重组表达载体转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌得到，其中，所述重组表达载体包括编码由内皮唾液酸蛋白的单链抗体和Caspase-3形成的重组蛋白的核苷酸序列。

在其中一个实施例中，所述编码重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

在其中一个实施例中，所述减毒鼠伤寒沙门氏菌为减毒鼠伤寒沙门氏菌VNP20009。

一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建方法，包括以下步骤：

将目的表达片段导入表达空载体，得到重组表达载体，所述目的表达片段含有编码由内皮唾液酸蛋白的单链抗体和Caspase-3形成的重组蛋白的核苷酸序列中的一种；及

将所述重组表达载体转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌中，得到重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。

在其中一个实施例中，所述编码重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

在其中一个实施例中，所述表达空载体选自pcDNA3.3c质粒、pEnCMV-WAC-3×FLAG质粒及pCDNA3.1-Mbnl3-m-Myc质粒中的一种。

上述重组表达载体或上述重组减毒鼠伤寒沙门氏菌或上述重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建方法制得的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在制备抗肿瘤药物中的应用。

在其中一个实施例中，所述肿瘤为实体瘤。

一种抗肿瘤药物，包括上述重组表达载体或上述重组减毒鼠伤寒沙门氏菌或上述重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建方法制得的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。