[发明专利]一种环状RNA检测试剂盒预测三阴性乳腺癌新辅助化疗反应性

说明书

本发明提供一种预测三阴性乳腺癌新辅助化疗敏感性的环状RNA，所述环状RNA为hsa_circRNA_038632，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还提供一种预测三阴性乳腺癌新辅助化疗敏感性的试剂盒。本发明首次发现了hsa_circRNA_038632与三阴性乳腺癌患者对新辅助化疗的反应性之间的相关性，通过检测hsa_circRNA_038632的表达水平可以预测三阴性乳腺癌患者对新辅助化疗的反应性，从而有助于医生确定三阴性乳腺癌患者的化疗方案。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及使用一种环状RNA检测试剂盒预测三阴性乳腺癌新辅助化疗反应性。

背景技术

乳腺癌是全世界发病率最高的女性恶性肿瘤。三阴乳腺癌(triple-negativebreast cancer,TNBC)是指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人类表皮生长因子受体-2(HER-2)表达均阴性的乳腺癌，占整个乳腺癌群体的15％-20％。与激素受体阳性或HER2阳性的乳腺癌相比较，大部分的三阴乳腺癌临床特征表现为侵袭性强，组织学分级较高，预后差，易发生内脏转移。由于三阴性乳腺癌缺乏ER、PR和HER2受体的表达，常规的内分泌治疗与HER2靶向治疗不敏感，化疗仍是其除手术外最为主要的治疗手段。因此，三阴性乳腺癌患者的预后情况在很大程度上依赖于患者对于化疗药物的敏感性。而化疗敏感性以及化疗耐药是一个多因素参与的表型，涉及到肿瘤特征，药物的效应以及患者机体对药物治疗的反应。找寻到与三阴性乳腺癌化疗敏感性相关的指标，将有助于治疗选择以及成为可能的治疗靶点。新辅助化疗是指在实施局部治疗方法(如手术或放疗)前所做的全身化疗，目的是使肿块缩小、及早杀灭看不见的转移细胞，以利于后续的手术、放疗等治疗。既往研究证实，乳腺癌新辅助化疗病理反应性能够反应患者对于化疗药物的敏感性。通过新辅助化疗达到病理完全缓解(pCR)的患者，其无病生存率和无复发生存率相较于未达到病理完全缓解(non-pCR)的患者均有明显提高。然而，新辅助化疗也有风险，部分患者接受新辅助化疗的效果不好，使病变增大或患者体质下降，也可能失去根治肿瘤的机会。因此在进行新辅助化疗前进行新辅助化疗反应性的预测对于控制新辅助化疗的风险是非常必要的。

既往研究提示，非编码RNA作为生命体内重要的调节分子参与到药物摄入、排出、代谢等多个阶段，可调控细胞内不同水平的多种药物代谢相关蛋白而影响化疗敏感性。环状RNA属于内源性非编码RNA的一种，其结构为共价环状闭合的单链RNA。环状RNA广泛存在于各种生物细胞中，具有结构稳定、丰度高和组织特异性表达等特征。最近的研究表明，一些环状RNA作为竞争性内源RNA(ceRNA)来发挥基因表达调控的作用。环状RNA利用其microRNA应答元件结合miRNA,以阻断miRNA对其靶标表达的抑制作用，从而调控其他相关RNA的表达水平。环状RNA与蛋白编码基因一样，具有主要的生物学功能。例如既往研究报道，circAKT3以及circ_0076305分别在胃癌和肺癌中的铂类化疗药物的抗性中起重要作用。由此可见，环状RNA有望成为肿瘤治疗新的疗效判定标志物和靶向治疗的工具，为人类战胜三阴性乳腺癌提供新的策略。

发明内容

本发明的目的在于通过研究证实hsa_circRNA_038632在三阴性乳腺癌中高表达，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，将其应用于预测三阴性乳腺癌新辅助化疗的反应性预测，进而应用于医药领域。基于该特异性提供一种性价比高、易于推广应用的三阴性乳腺癌新辅助化疗疗效评估试剂盒。

本发明试剂盒包括扩增hsa_circRNA_038632的PCR引物，所述引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:2～3所示。

本发明试剂盒还包括：Trizol、三氯甲烷、异丙醇、无酶水；逆转录缓冲液、氯化镁、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶、随机逆转录引物；实时定量PCR缓冲液、内参实时定量PCR引物、SYBR-Green染料、Taq聚合酶、双蒸水。

将本发明的试剂盒应用于预测三阴性乳腺癌新辅助化疗的敏感性。