[发明专利]一种以黄素单核苷酸为荧光探针测定磷酸根含量的方法

权利要求书

1.一种以黄素单核苷酸为荧光探针测定磷酸根含量的方法，其特征在于：是以黄素单核苷酸FMN为荧光探针，通过磷酸根与FMN在Fe₃O₄纳米颗粒表面的竞争吸附，实现磷酸根含量的检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：FMN侧链末端的磷酸根在Fe₃O₄纳米颗粒表面吸附，造成FMN荧光淬灭；当遇到磷酸根时，磷酸根对Fe₃O₄表面吸附的FMN进行置换，使FMN从Fe₃O₄表面解吸附，荧光得以恢复，通过检测荧光强度，实现磷酸根含量的测定。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、配置检测用FMN@Fe₃O₄溶液

将Fe₃O₄纳米颗粒分散在水中，配成浓度为2mg/mL的Fe₃O₄纳米颗粒溶液；

配制浓度为5μmol/L的FMN溶液、浓度为4mol/L的氯化钠溶液和浓度为100mmol/L pH＝5.8的醋酸盐缓冲溶液；

取0.5mL Fe₃O₄纳米颗粒溶液、0.2mL FMN溶液、0.125mL氯化钠溶液、0.8mL醋酸盐缓冲溶液和0.175mL去离子水，振荡混合均匀后，再室温静置0.5h，使荧光探针FMN在Fe₃O₄纳米颗粒表面充分吸附，即获得检测用FMN@Fe₃O₄溶液；

步骤2、标准工作曲线的绘制

配置浓度范围在2μmol/L-75μmol/L的磷酸钠标准工作溶液，分别取0.2mL加入到1.8mL所述检测用FMN@Fe₃O₄溶液中，室温静置1h，使FMN充分解吸附，然后在激发波长为450nm条件下测定521nm处的荧光强度，记为I标；

将0.2mL去离子水加入到1.8mL所述检测用FMN@Fe₃O₄溶液中，室温静置1h，作为空白样品，在激发波长为450nm条件下测定521nm处的荧光强度，记为I₀；

计算ΔI＝I_标-I₀，以ΔI对磷酸根的浓度关系，做标准工作曲线；

步骤3、待测样品检测

取0.2mL待测样品加入到1.8mL所述检测用FMN@Fe₃O₄溶液中，室温静置1h，使FMN充分解吸附，然后在激发波长为450nm条件下测定521nm处的荧光强度，记为I_样品；

计算ΔI_样品＝I_样品-I₀，再根据步骤2的标准工作曲线，获得所述待测样品的磷酸根含量。