[发明专利]微藻中提取蛋白的纯化方法

说明书

本发明公开了微藻中提取蛋白的纯化方法，该纯化方法包括以下步骤：该纯化方法包括以下步骤：将乙烯乙二醇醚和铁卟啉置入反应容器中混合均匀形成抑制剂，其中乙烯乙二醇醚具有标准大气压下的第一沸点，且铁卟啉形成抑制剂具有标准大气压下的第二沸点；将乙烯乙二醇醚和铁卟啉形成抑制剂加热至使乙烯乙二醇醚和铁卟啉形成抑制剂蒸发的温度；冷凝蒸发的乙烯乙二醇醚和铁卟啉形成抑制剂，以提供乙烯乙二醇醚和铁卟啉形成抑制剂的纯化混合物，最后对其分离纯化。该微藻中提取蛋白的纯化方法，通过该纯化方法能够对微藻中的蛋白完全纯化，同时纯化方法无任何污染，工艺流程简单，成本低，可大范围推广。

技术领域

本发明涉及化工领域，具体为微藻中提取蛋白的纯化方法。

背景技术

蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。

蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。一般蛋白纯化采用的方法为树脂法。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开，由于此时样本体积大、成分杂，要求所用的树脂高容量、高流速、颗粒大、粒径分布宽.并可以迅速将蛋白与污染物分开，必要时可加入相应的保护剂(例如蛋白酶抑制剂)，防止目的蛋白被降解。精细纯化阶段则需要更高的分辨率，此阶段是要把目的蛋白与那些分子量大小及理化性质接近的蛋白区分开来，要用更小的树脂颗粒以提高分辨率，常用离子交换柱和疏水柱，应用时要综合考虑树脂的选择性和柱效两个因素。选择性指树脂与目的蛋白结合的特异性，柱效则是指各蛋白成分逐个从树脂上集中洗脱的能力，洗脱峰越窄，柱效越好。仅有好的选择性，洗脱峰太宽，蛋白照样不能有效分离；

而现有技术纯化方法不能够对微藻中的蛋白完全纯化，工艺流程复杂，成本高，为此，我们提出微藻中提取蛋白的纯化方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供如下技术方案：微藻中提取蛋白的纯化方法，该纯化方法包括以下步骤：

S1：将乙烯乙二醇醚和铁卟啉置入反应容器中混合均匀形成抑制剂，其中乙烯乙二醇醚具有标准大气压下的第一沸点，且铁卟啉形成抑制剂具有标准大气压下的第二沸点；

S2：将乙烯乙二醇醚和铁卟啉形成抑制剂加热至使所述乙烯乙二醇醚和铁卟啉形成抑制剂蒸发的温度；

S3：冷凝蒸发的乙烯乙二醇醚和铁卟啉形成抑制剂，以提供乙烯乙二醇醚和铁卟啉形成抑制剂的纯化混合物，最后对其分离纯化；

S4：将酶解液离心，取上清液，超滤，凝胶层析；

S5：取洗脱液，喷雾干燥，最终制得蛋白粉。

优选的，满足以下不等式第一沸点≤1.10≤第二沸点。

优选的，S2中抑制剂蒸发的温度维持在102-120℃。

优选的，喷雾干燥的温度为160-180℃。

优选的，在上清液进行超滤时，超滤机的气压为0.1-1.8MPA。

与现有技术对比，本发明具备以下有益效果：该微藻中提取蛋白的纯化方法，通过该纯化方法能够对微藻中的蛋白完全纯化，同时纯化方法无任何污染，工艺流程简单，成本低，可大范围推广。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

微藻中提取蛋白的纯化方法，该纯化方法包括以下步骤：