[发明专利]一种Twist基因表达检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种Twist基因表达检测试剂盒，所述试剂盒包括针对检测Twist基因mRNA的假捕获探针、捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括有扩增探针和标记探针；其中，所述假捕获探针用于对生物样本进行预杂交，所述捕获探针为自组装聚合分支核酸探针，用于连接目标mRNA和扩增探针，所述扩增探针连接捕获探针与标记探针，所述标记探针连接扩增探针与荧光基团。上述试剂盒具有灵敏度高、特异性强和准确率高等优点，可用于检测生物样本中Twist基因的表达水平。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种Twist基因表达检测试剂盒。

背景技术

Twist基因，是碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子家族成员之一，最初于1987年在果蝇中被发现，其在胚胎发育过程中起关键调控作用(Pei H,et al.,MedChemComm,2017,8,268-275)。迄今为止，脊椎动物中已鉴定出两个Twist基因，分别为Twist 1和Twist 2(又叫Dermo-1)，它们的bHLH和羧基端的功能域有超过90％的相似性；但是，Twist 1的氨基端富含甘氨酸，而Twist 2的氨基端缺少甘氨酸。其中，Twist 1为通常所说的Twist基因。人类Twist基因定位于染色体7p21.1，包含4个外显子。Twist在健康成人组织中很少检测到，但在多种癌症组织如乳腺癌、前列腺癌、子宫癌、肝癌等中经常高表达。近年来，Twist基因被认为是一种重要的上皮-间质转化(EMT)诱导因子，与肿瘤的侵袭、侵犯和转移有关。

鉴于Twist表达与肿瘤的密切关系，促使我们开发一种Twist基因表达检测试剂盒，该试剂盒将有助于进一步深入研究Twist基因表达在各种肿瘤发生、发展及预后方面的临床意义。

目前Twist表达检测多采用免疫组化和实时定量PCR。免疫组化被认为是检测癌组织样本中Twist蛋白表达的最佳选择(Zeng J et al.,Translational lung cancerresearch,2015,4,236)。但是，该方法是在蛋白水平上检测Twist表达，不同一抗、不同抗体稀释度的使用以及染色方法与评价方法的不同都可能影响免疫组化灵敏度，进而影响检测结果的判读；此外，免疫组化检测Twist蛋白表达的cut-off值标准和cut-off值阈值主观不统一，也将影响检测结果的判读。实时定量PCR是检测Twist基因表达水平常用的方法。该方法具有灵敏度高、序列特异性强等优点；但是，该方法对实验条件的要求较高，从取样开始到最后结果的分析，每一步都必须要严格操作，否则难以确保检测基因表达水平结果的准确和可靠(Bustin SNolan T,European journal of clinical investigation,2017,47,756-774)。专利CN102925543A公开了一种白血病病变前期mRNA水平原位杂交检测试剂盒及检测方法和应用，该专利的试剂盒和检测方法使用以Twist基因为目的基因设计的带标记物的核酸探针通过原位杂交技术可在mRNA水平上检测Twist基因的表达，具有操作方便、简单的特点，但由于不能进行信号放大，因此其灵敏度在一定程度上受到了限制。

为此，有必要开发出一种灵敏度高、特异性强、准确率高的Twist基因检测试剂盒。

发明内容

基于此，本发明提供一种Twist基因表达检测试剂盒，其具有灵敏度高、特异性强和准确率高等优点，可用于生物样本中Twist基因的表达水平。

具体技术方案为：

一种Twist基因表达检测试剂盒，包括针对检测Twist基因mRNA的假捕获探针、捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括有扩增探针和标记探针；其中，

(1)假捕获探针：所述假捕获探针用于对生物样本进行预杂交，其为含有逆转录转座子的重复序列的局部序列或含有与所述重复序列各不相同的局部序列的组合，每条假捕获探针的碱基序列长度为20-70bp；所述假捕获探针既不与目标mRNA发生杂交，也不与捕获探针、扩增探针以及标记探针发生杂交；