[发明专利]一种抗人HER-2单克隆抗体，抗原、杂交瘤细胞株及免疫组化试剂盒

说明书

本发明涉及一种抗人HER‑2单克隆抗体，抗原、杂交瘤细胞株及免疫组化试剂盒，属于生物工程领域。本发明中提供的抗人HER‑2单克隆抗体，是以人HER‑2胞内区片段蛋白(676‑1255aa)作为抗原通过免疫学方法制备而成；人HER‑2蛋白胞内区近C末端具有良好的抗原表位，以其作为抗原制备抗体，能够为后续筛选获得优势抗体提供更大的概率。本发明中的抗人HER‑2单克隆抗体通过动物免疫、细胞融合、无血清培养和纯化过程得到，所获得的抗人HER‑2单克隆抗体的特异性强、灵敏度高。

技术领域

本发明涉及一种抗人HER-2单克隆抗体，抗原、杂交瘤细胞株及免疫组化试剂盒，属于生物工程领域。

背景技术

HER-2基因又称为neu或c-erbB-2基因，是一种细胞来源癌基因，其阳性表达可见于各种癌症，如乳腺癌、卵巢癌、胃癌、食管癌、涎腺肿瘤、肺癌、胆管癌、膀胱癌、前列腺癌、结直肠癌等。目前，对HER-2癌基因蛋白产物P185的病理研究首先多见于乳腺癌，其作用也较为明确。HER-2蛋白具有酪氨酸激酶活性的跨膜受体样蛋白，由胞外区、跨膜区及胞内区构成，是表皮生长因子受体(HER)家族成员之一。目前普遍认为HER-2蛋白产物的阳性表达可作为判断乳腺癌预后的一个独立指标。

公布号为CN 103102414A的中国发明专利申请公开了一种抗HER2蛋白单克隆抗体及其用途，所述抗HER2蛋白单克隆抗体是通过扩增HER2基因的ORF全序列，表达全长HER2蛋白，并以其作为抗原通过免疫学方法制备单克隆抗体；该抗原在制备过程中存在以下问题：全长的HER2蛋白难以表达，需要使用HEK293T细胞进行表达，但表达量仍较低。公布号为CN101463344A的中国发明专利申请公开了一种抗人Her2单克隆抗体杂交瘤细胞株、单克隆抗体、试剂盒及其用途，所述单克隆抗体使用HER2蛋白的胞外区作为抗原进行制备，但是该方法能够筛选到的细胞株数量较少，其所表达的HER2抗体的量也较低。

发明内容

本发明的目的是提供了一种抗人HER-2单克隆抗体，所述抗人HER-2单克隆抗体的特异性强、灵敏度高。

本发明还提供了一种人HER-2抗原，所述人HER-2抗原可用于生产抗人HER-2单克隆抗体。

本发明还提供了一种抗人HER-2单克隆抗体杂交瘤细胞株，所述抗人HER-2单克隆抗体杂交瘤细胞株可用于分泌抗人HER-2单克隆抗体。

本发明还提供了一种用于检测人HER-2蛋白的免疫组化试剂盒，所述试剂盒能够快速、准确地检测出人HER-2蛋白。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种抗人HER-2单克隆抗体，所述抗人HER-2单克隆抗体是由抗人HER-2单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌得到；

所述抗人HER-2单克隆抗体杂交瘤细胞株是以人HER-2胞内区片段蛋白作为抗原制备而成，所述人HER-2胞内区片段蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

或者所述抗人HER-2单克隆抗体杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞系CH-HER2，保藏编号：CCTCC NO:C 2019325。

本发明中提供的抗人HER-2单克隆抗体，是以人HER-2胞内区片段蛋白(676-1255aa)作为抗原制备而成；人HER-2蛋白胞内区近C末端具有良好的抗原表位，以其作为抗原制备抗体，能够为后续筛选获得优势抗体提供更大的概率。本发明中所获得的抗人HER-2单克隆抗体的特异性强、灵敏度高。

所述人HER-2胞内区片段蛋白可以通过常规的方法获得。优选的，所述人HER-2胞内区片段蛋白是由大肠杆菌表达得到。

具体的，所述人HER-2胞内区片段蛋白是由包括如下步骤的方法制备得到：

1)获得人HER-2胞内区片段蛋白的基因序列；