[发明专利]用于检测S.suis 2感染的合成肽及其应用

说明书

本发明公开了用于检测S.suis 2感染的合成肽及其应用。一种用于检测S.suis 2感染的合成肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述的合成肽作为包被抗原在制备S.suis 2感染快速辅助诊断试剂盒中应用。本发明提供了一种自行设计的合成肽，通过实验证实，该合成肽能够捕捉到S.suis 2感染后人体外周血中的特异性抗体，可以作为包被抗原应用在S.suis 2感染快速辅助诊断试剂盒中。本发明为S.suis 2的快速辅助诊断提供了新思路，可以降低由于S.suis 2感染诊断不及时造成的死亡，具备潜在的良好临床应用价值。

技术领域

本发明属于医学检测领域，涉及用于检测S.suis 2感染的合成肽及其应用。

背景技术

2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2，S.suis 2)属球菌科、链球菌属(Streptococci)，革兰阳性兼性厌氧菌，是一种重要的人兽共患传染病病原菌。S.suis 2不仅能够感染猪导致急性败血症、脑膜炎、心内膜炎和急性死亡，而且可以通过呼吸道和伤口等传播途径，导致人的感染发病和死亡。本病呈全球性分布，对相关从业人员的健康构成严重威胁，已确定为重要的新发传染病病原体。1998年和2005年分别在我国的江苏省和四川省暴发了大规模S.suis 2感染疫情，患者中出现高比例的、国内外罕见的链球菌中毒性休克综合征(Streptococcal toxic shock syndrome,STSS)。患者病程极为凶险，可出现心脏、肝功能损坏、血细胞破坏及造血系统抑制、脑膜炎、听神经损坏等多器官功能受损表现，多在发病1～3日内死亡^[1-2]。作为一种新现人兽共患传染病病原，S.suis 2流行菌株表现出的高致病性和高病死率特征已经成为全世界关注的公共卫生的焦点^[2-4]，而尽早行相应抗感染治疗可大大降低患者死亡率。迄今为止脑脊液和外周血培养仍然是判断人感染S.suis2的金标准，但血培养易受抗凝剂、抗菌药物、标本采集时间及培养方法等多因素影响，阳性率往往较低，所以建立可靠的检测方法对S.suis 2感染的对症治疗尤为重要。因此，研究S.suis 2的蛋白结构，筛选特异性肽段并建立快速诊断S.suis 2感染的方法，对感染早期的应急处置具有重要临床意义。

Sao蛋白(Surface antigen one)，是Li等在大规模搜寻与S.suis 2强致病性相关的功能蛋白的研究过程中发现蛋白^[5]。它通过C端LPVTG基序锚定在细胞壁表面，具有高度的保守性^[5]。免疫电镜实验证实Sao是一种广泛分布于菌体表面的蛋白，并且Sao蛋白特异性抗体可以和S.suis 2的多种分离株发生特异性反应^[5]。表明Sao蛋白是在S.suis 2感染过程中表达的有效抗原。可见Sao蛋白具有成为S.suis 2感染筛选分子的巨大潜能。实验室前期工作表明，重组Sao蛋白纯化难度大，通过对Sao蛋白一级结构分析，Sao蛋白不稳定系数为42.24，高于阈值40，是不稳定蛋白。在实验过程中遇到了类似易降解问题：蛋白纯化过程中高浓度咪唑洗脱时仍出现蛋白杂带，系重组Sao蛋白降解所致(图1)。因此重组Sao蛋白保存时需加入4种蛋白酶抑制剂PMSF、Pepstantin、Leupeptin和Aprotinin，于4℃仅可稳定一周，-20℃仅可稳定6个月。这些因素阻碍了重组Sao蛋白作为检测标志物的进一步开发。

目前已报道的关于Sao蛋白的免疫学信息分析较少，基于Sao蛋白免疫优势表位的检测标志物研究未见报道。若能筛选到S.suis 2感染特异表达的优势表位，并研制相应的辅助诊断试剂盒，就能实现S.suis 2感染的快速辅助诊断，这将大幅度降低由于S.suis 2感染诊断不及时造成的死亡。

发明内容

本发明的首要目的是针对上述技术问题，提出一种与S.suis 2感染快速辅助诊断相关的基于Sao蛋白免疫优势表位的检测标志物。

本发明的第二个目的是提供上述Sao蛋白免疫优势表位在制备S.suis 2感染快速辅助诊断试剂盒中的应用。