[发明专利]一种软骨祖细胞培养基及其制备方法和应用

权利要求书

1. 一种软骨祖细胞培养基，其特征在于，所述培养基由DMEM培养基、F12培养基、脯氨酸、丙酮酸钠、维生素C、胰岛素生长因子、碱性成纤维细胞生长因子2、转铁蛋白、ROCK抑制剂、p38抑制剂和GSK-3α/β抑制剂组成，其中DMEM培养基与F12培养基的体积比为1：0.5-2;以所述培养基的总体积为基准，所述培养基维生素C的浓度为50-200μg/mL，所述胰岛素生长因子的浓度为1-150ng /mL，所述FGF2的浓度为1-150ng/mL，所述GSK-3α/β抑制剂的浓度为1-30uM，所述转铁蛋白的浓度为5-100μg/mL，所述ROCK抑制剂的浓度为1-50uM，所述p38抑制剂的浓度为1-20uM，所述脯氨酸的浓度为0.35-10mM，所述丙酮酸钠的浓度为1-15mM；

所述GSK-3α/β抑制剂选自牌号为CHIR99021的GSK-3α/β抑制剂，所述ROCK抑制剂选自牌号为Y27632的ROCK抑制剂，所述p38抑制剂为选自牌号为SB202190的p38抑制剂。

2.根据权利要求1所述的一种软骨祖细胞培养基的制备方法，替特征在于，通过以下步骤实现：

（1）将DMEM培养基、F12培养基、脯氨酸、丙酮酸钠、维生素C、胰岛素生长因子、碱性成纤维细胞生长因子2、转铁蛋白、ROCK抑制剂、GSK-3α/β抑制剂、p38 MAPK抑制剂，制得混合物M1；

（2）将混合物M1调节pH和渗透压，得到混合物M2；

（3）将混合物M2进行灭菌处理，制得软骨祖细胞培养基;

步骤（2）中加入碱调节pH值，所述碱选自氢氧化钠，混合物M2的pH值为7.3-7.5，混合物M2的渗透压为330-360mOsm/kg;

步骤（3）中灭菌处理选自射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，过滤除菌为通过0.2μm直径微孔的滤膜过滤灭菌。

4.根据权利要求1所述的培养基在培养人软骨祖细胞向多种细胞分化中的应用。