[发明专利]一种柑桔脱毒黄化砧木的高效培育方法及其应用

说明书

本发明属于农业种植技术领域，尤其涉及一种柑桔脱毒黄化砧木的高效培育方法及其应用。方法主要包括：将新鲜果实中枳壳种子取出，在45℃温水浸泡，自然冷却，种子继续在200mg/L的聚‑γ‑谷氨酸(PGA)中浸泡8小时。然后，撕开外种皮(无须去除外种皮)，将种子播种到含有1/2垤石和1/2沙的培养基质中，在培养钵中26℃，黑暗条件下培养2周，培育出的黄化砧木整齐一致，粗度达2‑3mm，黄化砧木经严格的消毒，被方便地用于柑桔茎尖微芽嫁接脱毒。本发明的黄化砧木的准备程序与传统的无菌条件培养砧木相比，具有操作简单，节省时间，降低劳动强度，降低成本，节省能源的优点。

技术领域

本发明属于农业种植技术领域，尤其涉及一种柑桔脱毒黄化砧木的高效培育方法及其应用。

背景技术

柑桔是全世界的大宗水果，柑桔黄龙病和其它病毒病对柑桔生产造成毁灭性的打击。无病毒苗木的生产成为柑桔产业健康发展的必经之路。

由于病毒类病害的系统侵染性，目前尚无有效的治疗方法，采用柑桔无病毒苗木是控制柑桔病毒病传播，促进柑桔生产可持续发展非常重要的措施之一。当前世界各国预防柑桔病毒类病害的通行做法是采用茎尖嫁接或热处理加茎尖嫁接方式对病毒进行脱除，然后栽种无病毒苗木。但目前，柑桔脱毒操作技术要求高，操作环节复杂，获得无病毒素苗木十分困难。

如申请号为CN201410132037.X，名称为《柑桔接穗预处理促使复合感染病原脱除的技术》的中国发明专利，是本申请的发明人早前研发的通过小分子杀细菌三氯生(TCL)及几种抗生素处理，获得脱除柑桔衰退病(CTV)和柑桔黄龙病(HLB)病原的无病毒茎尖材料。为茎尖微芽嫁接或嫩芽嫁接提供了病原浓度低或无病毒的茎尖材料。

申请号为CN201510896416.0，名称为《一种高效脱除柑橘碎叶病毒的方法》的中国发明专利，通过将感染了柑橘碎叶病毒的柑橘植株采用脉冲温度进行热处理，解决了传统高温热处理柑桔植株不能正常生长，导致植株热伤害，萌发无毒化嫩芽数量少的问题，从而促进萌发更多数量的无毒化嫩芽茎尖。

上述两篇现有技术主要是提供无毒茎尖材料，而茎尖嫁接中的黄化砧木的培养通常采用组织培养无菌操作，准备工作繁琐，工作量大，技术要求高。

申请号为CN201711375148.3，名称为《一种生物控制剂在脱除柑橘幼树黄龙病病原中的应用》的中国发明专利，是本申请的发明人早前针对柑橘幼树黄龙病病原去除研发的相关技术，主要通过对苗木喷施特定芽孢杆菌菌株的发酵液来降低茎尖带毒浓度，从而提高脱毒效率。

但是，上述方法仅是解决了苗木上黄龙病病原去除的问题，而在茎尖嫁接中的黄化砧木准备过程中依然存在着准备工作十分繁琐，劳动强度大，成本高，技术要求高，人员素质要求高等问题，从而影响出苗效率及后续脱毒工作。因此，在柑桔茎尖嫁接脱毒操作中，简化黄化砧木的培育程序至关重要。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种柑桔脱毒黄化砧木的高效培育方法及其应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。

本发明是这样实现的，一种柑桔脱毒黄化砧木的高效培育方法，包括：将新鲜果实中枳壳种子取出，在45℃温水浸泡后，自然冷却；之后继续在200mg/L的聚-γ-谷氨酸中浸泡；然后，撕开外种皮，将种子播种到由垤石和沙组成的培养基质中，在培养钵中26℃，黑暗条件下培养，培育出黄化砧木。培育出的黄化砧木整齐一致，粗度达2-3mm，黄化砧木经严格的消毒，被方便地用于柑桔茎尖微芽嫁接脱毒。

进一步地，所述聚-γ-谷氨酸的浓度为200mg/L。

进一步地，在聚-γ-谷氨酸中浸泡时间为8小时。

进一步地，在撕开外种皮后无需去除外种皮和内种皮。

进一步地，培养基中所述垤石和沙的比例为1：1。