[发明专利]一种液体稳定的β-羟丁酸测定试剂

说明书

本发明公开了一种液体稳定的β‑羟丁酸测定试剂，包括试剂一和试剂二，所述试剂一和所述试剂二反应比例为4:1，所述试剂一包括PH值为8.0～9.0的缓冲液20～200mmol/L、β‑羟丁酸脱氢酶4～10KU/L、黄递酶1～5KU/L，所述试剂二包括PH值为4.0～5.0的酸性缓冲液20～200mmol/L、单价金属卤酸盐10～100mmol/L、水溶性饱和一元醇30～80g/L、碘硝基四氮唑蓝0.1～1g/L、辅酶I 5～10g/L。通过水溶性饱和一元醇与单价金属卤酸盐联合的溶液体系解决酸性条件下碘硝基四氮唑蓝和辅酶I的水溶液稳定共存问题；采用两种酸碱体系的GOOD’S生物缓冲液实现生物酶稳定保存和无干扰反应问题；实现当前酶法试剂稳定性。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种液体稳定的β-羟丁酸测定试剂。

背景技术

酮体包括乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮，在人体是肝脏合成的，是脂肪代谢过程产物。正常情况下人血液中含量较少，但在一些特殊及病变情况下，如饥饿、糖尿病等原因，脂肪代谢增加，肝产生的酮体的速度超过肝外组织的利用速度，血液中酮体堆积形成酮血症，导致酸中毒。由于酮症酸中毒是一种威胁生命的疾病，因此及时准确检测酮体水平是十分关键的预知酮症酸中毒的重要手段。β-羟丁酸约占酮体总量的70％，是酮体的主要组成部分，因此β-羟丁酸的浓度可反映人体内酮体的水平，可作为衡量糖尿病酮症酸中毒疗效的重要指标，同时研究表明β-羟丁酸的检测有助于1型糖尿病并发酮症酸中毒的早期诊断，对糖尿病早期诊断有重要意。

目前血液中β-羟丁酸检测法为气相色谱法、分光光度法和酶法，其中酶法由于其准确、简便、灵敏及特异性高等特点，逐渐受到临床重视。现在主流酶法试剂中均涉及到碘硝基四氮唑蓝(INT)显色剂的使用，但由于INT水溶液不稳定，特变在酸性条件下可自行水解，导致试剂不稳定，因此如何在酸性缓冲体系下解决INT与辅酶Ⅰ(NAD)稳定共存问题，是实现当前酶法试剂稳定性提升及应用推广的技术难题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种液体稳定的β-羟丁酸测定试剂，通过水溶性饱和一元醇与单价金属卤酸盐联合的溶液体系解决酸性条件下INT和辅酶I的水溶液稳定共存的问题，同时采用两种酸碱体系的GOOD’S生物缓冲液实现生物酶稳定保存和无干扰反应问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种液体稳定的β-羟丁酸测定试剂，包括试剂一和试剂二，所述试剂一和所述试剂二反应比例为4:1，所述试剂一包括PH 值为8.0～9.0的缓冲液20～200mmol/L、β-羟丁酸脱氢酶4～10KU/L、黄递酶 1～5KU/L，所述试剂二包括PH值为4.0～5.0的酸性缓冲液20～200mmol/L、单价金属卤酸盐10～100mmol/L、水溶性饱和一元醇30～80g/L、碘硝基四氮唑蓝0.1～1g/L、辅酶I 5～10g/L。

其中，所述试剂一还包括非离子型表面活性剂0.5～5g/L，所述非离子型表面活性剂包括曲拉通X-100或月桂醚35中的一种。

其中，所述试剂一包括2～5g/L金属络合剂，所述金属络合剂包括乙二胺四乙酸钠盐、二乙烯基三胺基五乙酸二酐或草酸钠中的一种。

其中，所述试剂一包括20～50g/L多元醇，所述多元醇包括蔗糖、甘露醇或海藻糖中的一种。

其中，所述试剂一包括0.1～1g/L防腐剂，所述防腐剂包括叠氮钠、二氯乙酰氨或乙酸乙酯钠中的一种。

其中，所述试剂一中的缓冲液包括N-三甲基-3-氨基丙烷磺酸、三羟甲基甲基甘氨酸或N,N-二羟乙基甘氨酸缓冲液中的一种。

其中，所述试剂二还包括2～5g/L金属络合剂，所述金属络合剂包括乙二胺四乙酸钠盐、二乙烯基三胺基五乙酸二酐或草酸钠中的一种。

其中，所述试剂二中的酸性缓冲液包括2-吗啉乙磺酸-盐酸、N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸-盐酸、哌嗪-1,4-二乙磺酸-盐酸缓冲液中的一种。