[发明专利]一种抗sST2单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗sST2单克隆抗体的制备方法，包括sST2重组蛋白的制备、动物免疫、杂交瘤细胞的制备和单克隆抗体的制备，选择特定的sST2基因片段，优化了原核表达系统的条件，提高了蛋白的表达量和重组蛋白的纯度，免疫小鼠可以产生更高效价的抗体，制备的杂交瘤细胞株可持久、高效分泌高性能的抗sST2单克隆抗体。本发明还公开了一种抗sST2单克隆抗体，均为IgG1亚型，抗体的一致性好，效价高，免疫活性高、亲和力强，检测sST2的稳定性强、特异性和灵敏度高。本发明还公开了一种sST2单克隆抗体在免疫检测sST2产品中的应用，检测特异性强、灵敏度高、准确性好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种抗sST2单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

心力衰竭是众多心血管疾病的共同转归，其患病率在全球日益升高其病理生理机制，至今未能完全阐明。目前，对心力衰竭管理有明确诊断和评估价值的生物标志物仅有利钠肽，包括B型利钠肽(BNP)和氨基末端B型利钠肽(NT-proBNP)。但BNP为单一生物标志物，仅能反映心力衰竭病理生理机制的一个方面，且受肾脏功能、年龄、BMI以及不同原因所致肺动脉高压等的影响，临床亟需更多生物标志物以反映不同病理生理机制，对心力衰竭患者做出更准确和完整的评估。

在各种新兴生物标志物中，sST2反映心肌细胞受到生物机械刺激后的应变，是心肌细胞肥厚和纤维化的标志，且不受年龄、肾功能损害和体重指数的影响被认为在心力衰竭和其他心血管疾病中具有很高的应用价值。与传统的心衰标志物相比，sST2有着更强大的死亡预测能力，这对于心衰的预后有着极其重要的意义。目前，国外市场上已出现sST2检测试剂盒，但价格昂贵，国内sST2检测产品尚比较少，并且多为科研试剂，临床上的应用报道较少。因此，制备性能优异的抗sST2单克隆抗体，研发性能优良的国产sST2定量检测试剂盒，对于降低医疗费用、提升患者满意度具有极其重要的社会意义。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种抗sST2单克隆抗体的制备方法，选择特定的sST2基因片段，优化了原核表达系统的条件，提高了蛋白的表达量和重组蛋白的纯度，免疫小鼠可以产生更高效价的抗体，制备的杂交瘤细胞株可持久、高效分泌高性能的抗sST2单克隆抗体。

本发明的目的之而在于提供一种抗sST2单克隆抗体，由上述方法制备，均为IgG1亚型，抗体的一致性好，效价高，免疫活性高、亲和力强，检测sST2的稳定性强、特异性和灵敏度高。

本发明的目的之三在于提供一种上述sST2单克隆抗体在免疫检测sST2产品中的应用，抗体的稳定性强，检测特异性强、灵敏度高、准确性好。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种抗sST2单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

sST2重组蛋白的制备：将sST2基因片段插入pET-28A(+)质粒中，获得PET-28A-sST2表达载体，然后转入大肠杆菌中，在含有IPTG的LB液体培养基中22-37℃诱导培养4-6h，提取、纯化即得高纯度的sST2重组蛋白；所述sST2基因片段的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示

动物免疫：将45-55μg所述sST2重组蛋白与相同体积的福氏佐剂充分乳化后，于BALB/c小鼠背部皮下多点注射免疫4次，每次免疫时间间隔为14d，筛选体内抗体效价为1：(150000-160000)的小鼠作为免疫小鼠；

杂交瘤细胞的制备：对所述免疫小鼠腹腔注射不加佐剂的sST2重组蛋白95-105μg，提取脾细胞悬浮液与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合，经选择性培养后，再进行3次亚克隆，即得能稳定分泌特异性抗sST2抗体的杂交瘤细胞；