[发明专利]一种具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的核酸适配体及其应用

说明书

本发明提供一种具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的核酸适配体及其应用，涉及核酸适配体的筛选和应用技术领域。所述核酸适配体的核苷酸序列的DNA分子为：TGCCTTACGTGTGGTTGGCCTATGCGTGCTACCGTGAAAG或其互补序列，采用磁珠‑SELEX结合毛细管电泳‑SELEX技术进行筛选得到，且该黄嘌呤氧化酶抑制活性的核酸适配体能在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂或降尿酸药物中应用。本发明克服了现有技术的不足，所述的核酸适配体具有显著的黄嘌呤氧化酶抑制活性及降尿酸活性，作为痛风、高尿酸血症、冠状动脉粥样硬化性心脏病、慢性心力衰竭、心肌梗死、高血压病等疾病的保健品和药物先导化合物，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及核酸适配体的筛选和应用技术领域，具体涉及一种具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的核酸适配体及其应用。

背景技术

黄嘌呤氧化酶是催化次黄嘌呤氧化为黄嘌呤，并继续催化黄嘌呤氧化为尿酸的酶。黄嘌呤氧化酶与多种疾病的病理状态密切相关，如痛风、肝炎、缺血再灌注、炎症、癌症以及衰老等。黄嘌呤氧化酶抑制剂能够有效缓解和治疗上述疾病。目前，广泛使用的黄嘌呤氧化酶抑制剂主要是别嘌呤醇。它能够降低血中尿酸含量，对控制痛风疾病具有良好效果。但是，该药的特异性较差，对其他嘌呤和嘧啶代谢酶亦有抑制作用，从而引起不同程度的不良反应，甚至是致命的过敏综合征。面对选择有限的黄嘌呤氧化酶抑制剂和各种不良反应，医患人员通常十分为难。因此，研发新一代低毒副作用的高效黄嘌呤氧化酶抑制剂已成为当务之急。

核酸适配体(Aptamer)是通过体外分子进化(SELEX)技术，从寡核苷酸序列库中，筛选得到的能与靶分子特异性结合的一段寡核苷酸序列。核酸适体在医学诊断和疾病治疗中具有突出的应用优势，主要表现在：①对靶分子具有高度的结合能力，这种能力无论是在特异性方面还是在亲和力方面，都高于抗体对抗原的结合能力；②识别的靶分子范围广，从金属离子到蛋白酶再到细胞，核酸适体均能识别；③在体内没有免疫原性，不产生异源反应；④分子小，易合成，可修饰标记，稳定性好。基于以上核酸适体的优良特性，如果获得专一识别黄嘌呤氧化酶的核酸适体抑制剂，不仅能够避免由于交叉抑制其他代谢酶所引起的不良反应，而且不会产生免疫反应。同时，由于合成容易、分子稳定、可修饰标记，黄嘌呤氧化酶核酸适体抑制剂的生产成本和保存成本很低，并能够延伸应用于分子识别、影像定位、医学诊断以及药物筛选等多项领域。

目前，已公布的黄嘌呤氧化酶抑制剂多是化学合成物、天然提取物以及多肽类物质，本发明首次公布了一种对黄嘌呤氧化酶活性具有抑制作用的核酸适配体，基于本发明有望开发出成本低、毒副作用小的新一代黄嘌呤氧化酶抑制剂，在疾病防疗、医学诊断以及药物筛选方面，具有重要的科学理论意义和实际应用价值。

发明内容

针对现有技术不足，本发明提供一种具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的核酸适配体及其应用，所述的核酸适配体具有显著的黄嘌呤氧化酶抑制活性及降尿酸活性，作为痛风、高尿酸血症、冠状动脉粥样硬化性心脏病、慢性心力衰竭、心肌梗死、高血压病等疾病的保健品和药物先导化合物具有良好的应用前景。

为实现以上目的，本发明的技术方案通过以下技术方案予以实现：

一种具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列的DNA分子为：TGCCTTACGTGTGGTTGGCCTATGCGTGCTACCGTGAAAG或其互补序列。

优选的，所述核酸适配体的筛选方式包括以下步骤：

(1)选取随机文库，采用磁珠-SELEX技术进行第一轮筛选；

(2)采用毛细管电泳-SELEX技术进行2-6轮筛选；