[发明专利]一种利用CRISPR-Cas9技术建立CDK13基因敲除动物模型的方法

权利要求书

1.一种利用CRISPR-Cas9技术建立CDK13基因敲除动物模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：靶向小鼠CDK13基因的gRNA载体构建

通过对CDK13基因进行分析，选择合适的敲除区域，选定具体的敲除区域后，根据靶基因设计一对相应的gRNA序列，并合成gRNA序列，gRNA序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；

S2：mRNA制备

将步骤S1中合成的一对gRNA序列在体外转录成mRNA；

S3：显微注射获得F0小鼠

将步骤S2中获得的mRNA与cas9质粒一并通过显微注射的方式注射入目标受精卵中，培育后获得F0代小鼠；

S4：鉴定筛选出阳性F0代小鼠

剪除出生的F0代小鼠的鼠尾，将鼠尾裂解后提取DNA做genetyping鉴定，根据鉴定结果挑选出有正确敲除的阳性F0代小鼠；

S5：阳性F0代小鼠性成熟后与WT小鼠配繁

将阳性F0代小鼠饲养至6-8周龄性成熟之后与WT小鼠配繁；

S6：筛选鉴定出阳性F1代杂合子小鼠

剪除步骤S5中配繁获得的F1代小鼠的鼠尾，提取DNA后做genetyping鉴定，确定基因型后筛选出其中的F1代杂合子小鼠；

S7：将步骤S6中的雌性F1代杂合子小鼠和雄性F1代杂合子小鼠自交，获得纯合后代。

2.一种利用CRISPR-Cas9技术建立CDK13基因敲除动物模型的试剂盒，其特征在于，包括gRNA序列以及相应的配套检测试剂，所述gRNA序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，所述配套检测试剂用于检测CDK13基因的剪切效果和评估基因敲除效率。