[发明专利]一种利用烟草水解液生产2-苯乙醇的方法

权利要求书

1.一种利用烟草水解液生产2-苯乙醇的方法，其特征在于，将产黑色素短梗霉(Aureobasidium melanogenum)接种到含有烟草水解液的培养基中进行发酵，所得发酵液经提纯后得到2-苯乙醇；所述烟草水解液为烟草废弃物经纤维素酶、半纤维素酶、漆酶、植酸酶、木聚糖酶、中性蛋白酶、角蛋白酶和脂肪酶处理后的酶解液；所述产黑色素短梗霉(Aureobasidium melanogenum)为产黑色素短梗霉(Aureobasidium melanogenum)A4，菌种保藏编号为CGMCC No.13177；所述烟草水解液通过如下方法制备获得：调节烟草废弃物溶液pH为3-4，并在105℃条件下加热10-20min；冷却至室温，再调节烟草废弃物溶液pH为10-11，同样在105℃条件下加热10-20min，冷却至室温；再调节烟草废弃物溶液pH为5.0-5.5，以烟草废弃物质量计，添加0.2-0.3g/g的纤维素酶，0.1-0.15g/g的半纤维素酶，0.2-0.25g/g的漆酶，0.05-0.1g/g的植酸酶以及0.15-0.2g/g的木聚糖酶，放置于40-50℃，200rpm/min摇床中酶解3-4天，得到酶解液；然后调节酶解液pH为6.5-7.5，添加0.02-0.05g/g的中性蛋白酶，0.03-0.05g/g的角蛋白酶，0.04-0.05g/g的脂肪酶，放置于40-50℃，200rpm/min摇床中酶解2-3天，得到烟草水解液；

所述含有烟草水解液的培养基配方为：4.5(wt)％～6.0(wt)％烟草水解液，1.5(wt)％～2.0(wt)％生物质糖，0.1(wt)％～0.3(wt)％K₂HPO₄，0.2(wt)％～0.4(wt)％KH₂PO₄，0.04(wt)％～0.06(wt)％MgSO₄·7H₂O，余量为水，pH值为4.5-5.5。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述烟草废弃物为碎烟叶，烟末，上部烟叶、烟花和烟草秸秆中的一种或多种的混合物。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物质糖为葡萄糖、果糖中的一种或两种的混合物。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵为30℃，180～250rpm/min的摇床中进行培养。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用烟草水解液生产2-苯乙醇的方法，步骤如下：

步骤一：产黑色素短梗霉(Aureobasidium melanogenum)的种子接种到YPD培养基中培养获得一级种子，将获得的一级种子接种到含有二级种子培养基的摇瓶中培养获得二级种子；

步骤二：取步骤一获得的二级种子液接种到含有烟草水解液的培养基中，调节pH值4.5-5.5，发酵24h后，以每升含有烟草水解液的培养基体积计，再加入5.0mL的三烷基氧化磷TRPO作为原位萃取剂，继续发酵50-60h；

步骤三：取步骤二发酵结束的发酵液，离心后取上清，过滤后进行气相检测，得到2-苯乙醇。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述二级种子培养基成分包含如下：1.5(wt)％～2.5(wt)％葡萄糖,1.0(wt)％～1.5(wt)％酵母粉,2.0(wt)％～2.5(wt)％蛋白胨,0.6(wt)％～0.8(wt)％K₂HPO₄,0.05(wt)％～0.07(wt)％MgSO₄·7H₂O,1.0(wt)％～1.4(wt)％NaCl,0.07(wt)％～0.09(wt)％(NH₄)₂SO₄，余量为水，pH为7.0-7.5。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述二级种子接种到发酵培养基中是按照15(v/v)％-25(v/v)％的接种量进行的。