[发明专利]羟基氧化酶CYB5A突变体与环系列产品的制备方法

说明书

本发明提供一种羟基氧化酶CYB5A突变体与环系列产品的制备方法。所述羟基氧化酶CYB5A突变体的突变位点包括：第83位氨基酸由赖氨酸突变为异亮氨酸，第137位氨基酸由脯氨酸突变为精氨酸，第233位氨基酸由谷氨酸突变为缬氨酸。所述羟基氧化酶CYB5A突变体对环系列醇类化合物具有较高的转化率，具有很好的工业化应用前景。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种羟基氧化酶CYB5A突变体与环系列产品的制备方法。

背景技术

环丁酮、环丙甲醛等环系列产品具有较高的商业价值与较好的应用前景，然而，目前环系列产品的制备方法多为化学合成方法，产率低且生产过程容易造成环境污染。

微生物转化是通过微生物细胞将复杂的底物进行结构修饰，也就是利用微生物谢过程中产生的某个或某一系列的酶对底物特定部位进行修饰的催化反应。

微生物转化技术具有以下优点：

1、反应条件温和、公害少、设备简单且反应速度快；

微生物转化的反应中一般无需高压、强热等比较苛刻的反应条件，只需在常温和pH为7左右的环境下进行反应即可；原料除了普通的培养基和底物外没有其它化学品，普遍认为公害较少；设备简单，反应条件比较温和，生产安全；微生物转化反应是酶催化的反应，在最合适的条件下，一秒内酶能催化底物转化为产物的分子个数数量级是10²～10⁶。

2、反应步骤较少；

随着现代生物技术的迅速发展，酶合成基因构建的基因工程菌可以把需要多步催化合成的中间体在一次发酵中转化完成。

3、回收率高、成本低；

微生物反应可以持续进行、反应量大、回收率高并可以大规模工业化生产，从设备和原料方面来说生产成本低于酶法和化学合成法。

发明内容

本发明的目的首先在于提供一种羟基氧化酶CYB5A突变体，对环系列醇类化合物具有较高的转化率，具有很好的工业化应用前景。

本发明的目的还在于提供一种多聚脱氧核糖核苷酸，包含上述羟基氧化酶CYB5A突变体的遗传信息。

本发明的目的还在于提供一种重组载体，包含上述多聚脱氧核糖核苷酸。

本发明的目的还在于提供一种重组细胞，包含上述重组载体。

本发明的目的还在于提供一种环系列产品的制备方法。

为实现以上目的，本发明首先提供一种羟基氧化酶CYB5A突变体，第83位氨基酸由赖氨酸突变为异亮氨酸，第137位氨基酸由脯氨酸突变为精氨酸，第233位氨基酸由谷氨酸突变为缬氨酸。

在本发明一些实施例中，所述羟基氧化酶CYB5A突变体包括如序列表中序列4所示的氨基酸序列。

本发明还提供一种多聚脱氧核糖核苷酸，包括上述羟基氧化酶CYB5A突变体的DNA编码序列以及与所述DNA编码序列互补的DNA序列中的至少一种。

在本发明一些实施例中，所述DNA编码序列包括如序列表中序列3所示的DNA序列。

本发明还提供一种重组载体，包含上述多聚脱氧核糖核苷酸。

本发明还提供一种重组细胞，包括宿主细胞以及位于所述宿主细胞内的上述重组载体。

在本发明一些实施例中，所述宿主细胞为大肠杆菌。

优选的，所述大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)。