[发明专利]用于检测rs909253位点的HRM分型引物及其应用

说明书

本发明具体提供用于rs 909253位点的HRM分型引物及其应用，该引物具有灵敏度高、特异性好等优点，HRM结果与PCR产物直接测序验证结果符合率为100%，通过对提供的rs 909253位点的HRM分型引物及其在检测rs 909253位点突变的相关试剂及检测试剂盒中的应用，能够使用HRM分型对rs 909253位点进行准确的检测，该方法对于人类rs 909253位点相关研究具有重要意义及价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及检测rs909253位点的HRM分型引物及其应用。

背景技术

人rs909253位点位于TNF-β基因内，TNF-α是一种多功能的细胞因子，在促进炎症反应和细胞增殖及诱导细胞凋亡方面具有重要作用。现有研究结果表明，rs909253位点突变与许多疾病的发生息息相关，rs909253位点的单核苷酸多态性与胃癌的遗传易感性、缺血性脑卒、儿童恶性淋巴瘤、精神分裂症、慢性阻塞性肺疾病的病程进展、视神经脊髓炎谱系疾病的发病等疾病息息相关。由此可见，rs909253 位点突变不仅与疾病易感性，疾病症状有关，还可能成为预测个体后期生活健康状态的生物学标志。

高分辨率熔解曲线(High Resolution Melting analysis，HRM)同许多荧光PCR技术一样，是利用特定dsDNA染料可以插入DNA双链小沟中(PCR产物)的特性，通过实时监测升温过程中dsONA解链，荧光染料脱落，荧光信号减弱或消失的过程，高分辨记录熔解曲线，从而对样品进行检测。HRM技术利用dsONA的物理性质，准确反映ONA序列碱基配对特异性与解链温度变化的情况，无需使用特异性标记探针，不受突变种类和突变位点的限制，具有高灵敏度和特异性、高通量、操作简单灵活、成本低优点。实验室检测证明，在PCR反应前或反应后加入饱和dsONA染料，对HRM分析.效果相同。在PCR后加入，可闭管进行HRM分析.无需凝胶电泳。HRM 分析，不损伤PCR产物，用于HRM分析的PCR产物仍可用于电泳、胶回收、测序等一系列后续操作。HRM可应用于核酸突变扫描、基因分型、甲基化检测、短串联重复序列分析、系列匹配和RNA编辑等多方面研究，已越来越受到国内外核酸分子实验室的欢迎和重视。对于目前绝大多数的突变分析方法来说，都很难鉴定出纯合子序列突变。在一些不同种类的小的扩增片段中，高分辨率熔解曲线则显示出了鉴定纯合子序列突变的能力，这种方法能鉴定出大多数的纯合突变。HRM技术在遗传学研究方面也带来极大便利，只需在PCR反应体系中加入双链DNA饱和荧光染料，在PCR反应之后再花15min，就可以完成96或384个样品的DNA变异扫描.采用这种方法，当片段的大小在150bp或者更小时，灵敏性最高。

本发明提供了检测rs909253位点的HRM分型引物及其应用，该引物包括与TNF-β基因的模板相匹配的引物F1和引物R1。该方法操作简单、快速、成本低、通量高、结果准确，实现了rs909253位点的准确检测。该方法对于人rs909253位点单核苷酸多态性相关研究具有重要意义及价值。

发明内容

针对现有技术中存在的不足问题，本发明的目的在于提供用于检测rs909253位点的HRM分型引物，通过对TNF-β基因rs909253位点单核苷酸多态性进行准确的检测，可简单、快速、成本低、通量高、结果准确的检测rs909253位点单核苷酸多态性信息。

本发明通过以下技术方案实现的：

本发明提供用于检测rs909253位点的HRM分型引物组合物，由引物F1和引物R1组成：

优选的，所述引物引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；引物R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

所述引物F1及引物R1用于使用HRM分型进行rs909253位点单核苷酸多态性检测。

同时，本发明还提供一种检测rs909253位点的HRM分型试剂组合物；