[发明专利]丝蛋白水凝胶及其制备方法、应用

权利要求书

1.小鼠胚胎干细胞的培养方法，其特征在于，取小鼠胚胎干细胞接种于丝蛋白水凝胶培养；

所述丝蛋白水凝胶由丝蛋白取向凝胶经包被材料包被制得；

所述包被材料为0.1%~10%的明胶、0.001%的透明质酸或1%的壳聚糖；

所述丝蛋白取向凝胶的制备方法为：取蚕丝与盐溶液混合煮沸后清洗、干燥，与LiBr溶液混合，透析，离心后收集上清，获得丝蛋白溶液；取所述丝蛋白溶液浓缩后稀释至浓度为0.5~4 wt %，静置，获得纳米纤维水凝胶；取所述纳米纤维水凝胶搅拌，施加电压，于正极收集所述丝蛋白取向凝胶；

所述丝蛋白取向凝胶的取向间隔为50~500μm；

所述纳米纤维水凝胶中纳米纤维的直径为10~20 nm，纳米纤维的长度为1~2 μm；

所述接种为采用干细胞完全培养基将小鼠胚胎干细胞接种于所述的丝蛋白水凝胶，黏附0.5~8h；

所述干细胞完全培养基的组分为：终浓度为1000 U/mL的白血病抑制因子，高糖DMEM基础培养基，终浓度为10%的胎牛血清，终浓度分别为100 U/mL和0.1 mg/mL的青链霉素，终浓度为0.1 mM的β-巯基乙醇，终浓度为1×的MEM非必需氨基酸溶液；

细胞黏附后培养基换成无白血病抑制因子培养基继续培养干细胞；

所述无白血病抑制因子培养基的组分为：高糖DMEM基础培养基，终浓度为10%的胎牛血清，终浓度分别为100 U/mL和0.1 mg/mL的青链霉素，终浓度为0.1 mM的β-巯基乙醇，终浓度为1×的MEM非必需氨基酸溶液。

2.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述接种的细胞密度为2×10⁴/cm²~10×10⁴/cm²，所述干细胞完全培养基或无白血病抑制因子培养基的用量为0.5mL~2mL。