[发明专利]一种多肽脱盐的方法

说明书

本发明属于药物化学技术领域，公开了一种多肽脱盐的方法。本发明多肽脱盐的方法将多肽样品上样至制备柱，以流动相A1和B冲洗，再以流动相A2和B冲洗，最后以A2和B进行梯度洗脱，收集样品，减压旋蒸，冻干后得脱盐精肽。与现有技术相比，本发明所述多肽脱盐的方法，能够在以烷基键合的硅胶填料为固定相的反相‑高效制备色谱系统上进行转盐，解决脱盐时样品难以被洗脱的问题，无需额外增加设备和物料，在转盐的同时能够进一步除去杂质，提高样品纯度，减少转盐后样品体积并增加样品浓度，整个过程操作简单，生产周期短，有利于大规模工业化生产。

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，涉及一种多肽脱盐的方法。

背景技术

多肽是具有两性结构的化合物，有的多肽化合物中既有酸性基团，也有碱性基团，有的多肽化合物中仅有酸性基团或仅有碱性基团。合成多肽的纯化过程会使用多种缓冲盐，比如三氟乙酸、磷酸铵(或钠、钾)、硫酸铵(或钠、钾)、醋酸铵(或钠、钾)、甲酸铵(或钠、钾)、高氯酸钠(或铵、钾)、碳酸氢铵(或钠、钾)、或氯化铵(或钠、钾)等。当多肽的纯度符合要求，杂质降低至所需的限度以下，就需要将上一步纯化的馏分中多余的缓冲盐除去，以获得某种盐形式的肽，即肽结合一定量的酸根或一定量的阳离子，或不结合任何离子的游离状态，这样能够使多肽药物保持较高的药物活性、较优的稳定性或具有良好的溶解性。

通常，肽的成盐类型为醋酸盐、三氟乙酸盐、盐酸盐或无盐，部分多肽会与阳离子结合制备成铵盐、钠盐或钾盐。在合成多肽的纯化过程中，一般采用烷基键合的硅胶填料为固定相的反相-高效制备色谱系统，大多数的转盐操作也会使用上述纯化的色谱系统，避免更换系统而导致增加额外的设备和耗材。有少部分的多肽采用反相-聚合物填料，或采用离子交换系统，或采用膜过滤的方式进行转盐。上述四种转盐方式中，以烷基键合的硅胶填料为固定相的反相-高效制备色谱系统是优选的方式，其具有流程简便，生产成本低，并能够进一步除去杂质等优势。但反相-聚合物填料、离子系统和膜过滤的方式需要增加额外的设备和耗材，且具有处理周期长，转盐不彻底，纯度降低，杂质增多变大等不利因素，所以首选反相-高效制备色谱系统进行转盐。

但是，反相-高效制备色谱系统一般使用烷基键合的硅胶填料为固定相，而由于某些多肽的特殊性质，以纯水和乙腈进行脱盐的过程中会出现样品无法被洗脱的现象，这会导致样品严重损失。

发明内容

有鉴于此，本发明为了解决上述的难题，提供了一种多肽脱盐的方法，该方法能够在以烷基键合的硅胶填料为固定相的反相-高效制备色谱系统上进行转盐，解决脱盐时样品难以被洗脱的问题。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种多肽脱盐的方法，将多肽样品上样至制备柱，以流动相A1和B冲洗，再以流动相A2和B冲洗，最后以A2和B进行梯度洗脱，收集样品，减压旋蒸，冻干后得脱盐精肽；

其中所述流动相A1选自纯水或稀的缓冲盐溶液；所述流动相A2为纯水或碳酸水溶液；所述流动相B选自乙腈、甲醇、乙醇或异丙醇中的任意一种或几种溶剂的任意比例混合。

本发明所述多肽脱盐的方法纯化和转盐使用同一个制备柱，无需更换填料，也无需增加额外的设备，即可完成脱盐，且脱盐的操作简单，有利于提高生产效率。

本发明中，在上样前还包括以流动相A1和流动相B平衡制备柱的步骤。

本发明所述多肽脱盐的方法通过提高脱盐过程的上样量，提高脱盐步骤的收率。本发明中，所述多肽样品的上样量为所述制备柱填料质量的1.0％～10.0％。进一步的，在一些实施方案中，所述多肽样品的上样量为填料重量的1.5％～6.0％。

本发明中，所述多肽为在反相制备色谱上难以被洗脱的肽。如利拉鲁肽、索玛鲁肽。

本发明中，所述多肽样品用流动相A1溶解后上样。