[发明专利]一种利用特基拉芽孢杆菌固态发酵烟草废弃物产碱性果胶酶的方法在审
| 申请号： | 201911380618.4 | 申请日： | 2019-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN113046341A | 公开（公告）日： | 2021-06-29 |
| 发明（设计）人： | 张海波;张鸽;咸漠;王帆;陈国强;门潇;刘丽娟;王纪明;李兴;李志豪 | 申请（专利权）人： | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N1/20;C12R1/07 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 邓宇 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 特基拉 芽孢 杆菌 固态 发酵 烟草 废弃 物产 碱性 果胶酶 方法 | ||
1.一种利用特基拉芽孢杆菌固态发酵烟草废弃物产碱性果胶酶的方法，其特征在于，将特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌液接入到含有烟草废弃物的固态发酵培养上，静置培养，然后提取获得碱性果胶酶；所述特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)CAS-MEI-2-33，菌种保藏编号为CGMCCNO.14826。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述烟草废弃物为烟梗。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述烟草废弃物为直径1-2cm烟梗颗粒。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述烟草废弃物为直径1-5mm烟梗颗粒。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有烟草废弃物的固态发酵培养基由如下重量份的原料组成：烟草废弃物颗粒4.5-5.5份，蛋白胨3.5-4.5份，磷酸二氢钾0.013-0.017份，硫酸铵0.15份和蒸馏水13-17份，pH 7.0-7.5。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特基拉芽孢杆菌(Bacillustequilensis)菌液的制备方法如下：将特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)CAS-MEI-2-33单菌落接种至LB液体培养基中，在35-37℃，160-200rpm条件下过夜培养8-12h，获得一级种子液；将一级种子液按照体积比1:50-1:100的体积比例接种至LB液体培养基中，37℃，180rpm条件下培养8-12h，获得二级种子液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述静置培养是指将特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)菌液喷洒于已灭菌处理的含烟草废弃物的固态发酵培养基中，按照每克干物质喷洒1.0×109-2.0×109个芽孢杆菌，使培养基中的相对湿度达70-80％，将接种后的培养基置于35-37℃隔水式培养箱中静置培养，发酵4-5d，所述干物质为烟草废弃物颗粒。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，碱性果胶酶的提取方法如下：以烟草废弃物质量计，向发酵结束后的培养基中加入pH 10.0-10.2，50mmol/L的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液6-10mL/g，或无菌蒸馏水6-10mL/g，浸提15-30min，获得果胶酶粗酶液。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述浸提为37℃摇床中振荡浸提30min，将浸提液以8000rpm/min离心30min，获得上清液为果胶酶粗酶液。
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