[发明专利]一种从衣藻提取油脂的方法

说明书

本发明公开了一种从衣藻提取油脂的方法包括衣藻的培养、干微藻粉的制备和油脂的提取，本发明衣藻在红蓝光的相互作用下使得衣藻中油脂的积累显著升高，且蓝光占比越高，油脂积累越多，红蓝光（1:2）下油脂的积累量最高，该油脂可以制备品质较好的生物柴油，有较好的市场应用价值。

技术领域

本发明属于微生物培养技术领域，特别涉及一种从衣藻提取油脂的方法。

背景技术

全球能源的供应主要依靠石油、天然气和煤炭等化石资源，随着经济的不断发展，化石能源的需求和消耗增长迅速，能源危机已成为全球性问题，发展可替代能源迫在眉睫。此外，化石能源燃烧后排放的大量污染物，会对人类健康和环境造成恶劣影响。生物柴油相对化石能源具有闪点高、运动粘度高、环境污染小、可再生等优点，是非常有潜力的替代能源。微藻因具有光合效率高、生产周期短、油脂含量高、不受季节和气候限制等优点，已成为生产生物柴油最有潜力的原料之一，以微藻制备生物柴油已经成为当前的研究热点。另外，微藻油脂在食品、保健品、医药和化妆品等领域也有广泛应用。光照是影响微藻细胞生长发育及细胞生化成分的重要环境因子之一，它会影响微藻的生长发育、光合作用、细胞形态和代谢产物的合成等。光照主要从光质、光强度和光周期等几个方面影响藻类的生长。因为光强度和光周期更容易进行调节，之前有关光影响微藻油脂积累的研究主要集中在光强和光周期，而不同光质对微藻油脂积累影响的研究较少。

Sun等研究发现当光强从50 μmol·m^-2·s^-1增加到 200 μmol·m-2·s-1时，Neoohloris oleoabundans 的生物量、脂肪酸含量显著升高。Solovchenko等研究发现高光强能显著提高Parietochlorisincisa总脂肪酸中C20:4的相对含量。Abomohra 等研究发现Scenedesmus obliquus在红光下生物量最高，蓝光下油脂产率最高，蓝红光下微藻的生长和油脂的生产显著提高。陈爱玲研究发现红光和白光能促进类波氏真眼点藻总脂的积累，而蓝光会明显抑制总脂的积累。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，本发明的采用红蓝光复合的方式进行照射，从而提高衣藻中油脂的含量，本发明的内容如下：

本发明的目的在于提供一种从衣藻提取油脂的方法，其技术点在于：所述的从衣藻提取油脂的方法包括以下步骤：

步骤1：衣藻的培养：将活化后的培养至对数生长期的新鲜微藻培养液，按照10%(v/v)的接种量接种到含有新鲜配制的微藻培养基的三角烧瓶中中，用4层纱布包裹瓶口，将所述的三角烧瓶放置于光照培养箱中进行培养；

步骤2：干微藻粉的制备：计量步骤1中培养好的衣藻培养液的体积，置于离心管中第一次离心得到第一衣藻藻体沉淀和第一上清液，弃去所述的第一上清液；用蒸馏水清洗所述的第一衣藻藻体沉淀，进行第二次离心得到第二衣藻藻体沉淀和第二上清液，收集所述的第二衣藻藻体沉淀，将所述的第二衣藻藻体沉淀置于65℃电热鼓风干燥箱中烘干至恒重，记录第二衣藻藻体沉淀干重即得所述的干微藻粉，计算干微藻粉的生物量如下：

步骤3：油脂的提取：将步骤2制备得到的干微藻粉准确称取100mg干藻粉中加入盐酸振荡混匀后，室温下放置20~40min，随后置于沸水浴中5~15min，立刻转入-100~-60℃冷冻10~30min，如此反复冻融3次；然后加入2倍体积的三氯甲烷和甲醇的混合液，混合均匀后离心，所述干微藻粉的油脂溶解于下层的三氯甲烷中，用移液枪吸取下层含有油脂的三氯甲烷层，将有含有油脂的三氯甲烷烘干后即得油脂，称重，计算油脂含量和油脂产量，计算公式如下：