[发明专利]一种提高融合细胞疫苗抗肿瘤效应的方法

说明书

本发明属于生物医学领域，尤其是涉及一种提高融合细胞疫苗抗肿瘤效应的方法，包括以下步骤：1）DC/B16融合细胞疫苗的制备；2）体外DC/B16融合细胞诱导CD4+T细胞向CD8ααTregs转化；3）体外DAPT阻断DC/肿瘤融合细胞疫苗刺激CD4+T细胞向CD8ααTregs转化；4）DC/肿瘤融合细胞诱导CD4+T细胞转化的CD8ααTregs，促进肿瘤的生长，本发明的DC/肿瘤疫苗联合DAPT为提高DC/肿瘤融合细胞疫苗在体内的抗肿瘤生物活性提供一个新的有效方法，本DC/B16融合细胞疫苗，已经在小鼠上试验成功，下一步可以在人体抗肿瘤临床中试验应用，为人类对抗肿瘤的临床使用提供了一种很好的方法。

技术领域

本发明属于生物医学领域，尤其是涉及一种提高融合细胞疫苗抗肿瘤效应的方法。

背景技术

在危害人类健康的多种疾病中，肿瘤成为最主要的杀手。肿瘤（tumour）是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物（neogrowth），因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物（neoplasm）。研究发现，肿瘤细胞会出现不同于正常细胞的代谢变化，同时肿瘤细胞自身可通过糖酵解和氧化磷酸化（OXPHOS）之间的转换来适应代谢环境的改变。目前治疗肿瘤的主要手段是手术、放射、化疗等，但由于恶性肿瘤大多发生隐匿，侵袭性强、进展快速、易转移，一旦发生转移，不再具有手术治疗的指征，而传统的放疗、化疗法效果差，导致远期疗效依然不甚理想，有待开发更为有效的治疗策略。近年来，免疫治疗逐渐成为肿瘤治疗领域的新手段，其主要针对肿瘤发生发展的机制，采用生物学技术进行干预和改善机体免疫能力，从而抑制肿瘤生长。肿瘤免疫治疗具有较强的特异性、不良反应少等优点，被认为是肿瘤治疗的希望所在。

目前，以DC为核心的肿瘤免疫治疗是近年来研究热点之一。DC即树突状细胞(dendritic cell,DC)因其表面具有星状多形性或树枝状突起而得名,DC尚无特异性细胞表面分子标志,主要通过形态学、组合性细胞表面标志、在混合淋巴细胞反应中能激活初始T细胞等特征进行鉴定。DC起源自骨髓多能造血干细胞,分化主要有两条途径:①髓样干细胞在 GM-CSF的刺激下分化为DC,称为髓样DC( myeloid dendritic cells,MDC),也称DC1,与单核细胞和粒细胞有共同的前体细胞;②来源于淋巴样干细胞,与T细胞和NK细胞有共同的前体细胞,称为淋巴样DC( Lymphoid dendritic cells,LDC)或浆细胞样DC(plasmacytoid dendritic cells,pDC),即DC2。DC是体内抗原提呈能力最强的抗原提呈细胞，在天然免疫及获得性免疫中扮演者重要角色，能显著刺激初始型 T 淋巴细胞增殖。在肿瘤的发展过程中，DC捕获肿瘤相关抗原（Tumor-associated antigens, TAAs），加工成抗原肽与MHC-I类分子和MHC-II类分子结合形成抗原肽-MHC分子复合物，迁移到次级淋巴器官。在次级淋巴器官，DC提呈抗原肽给天然CD4+ T细胞和CD8+ T细胞，激活和刺激这些细胞的分化，并启动TAA特异性T细胞介导的抗肿瘤免疫反应。因此，DC为基础的肿瘤疫苗成为治疗肿瘤研究的重点。许多抗肿瘤疫苗正在进行临床试验中，包括由美国食品和药物管理局批准了第一个DC疫苗治疗转移性前列腺癌。体外抗原负载DC是抗肿瘤免疫的第一步。负载抗原肽的方法包括：合成已知的TAA抗原肽、肿瘤裂解物、凋亡的肿瘤细胞、肿瘤RNA等等。但是，人们可获得的已知抗原很少，大多数的肿瘤抗原是未知的。研究者们发现利用PEG法将DC与肿瘤细胞直接融合，相邻细胞膜相互整合，胞质相互流通，即能表达所有已知的和未知的肿瘤抗原，又能表达DC表面分子，从而更有效的刺激T细胞的增殖和活化。很多研究已证明了DC/肿瘤融合细胞疫苗能够较好的活化CD4+ T细胞和CD8+ T细胞发挥抗肿瘤作用，但是临床试验并不十分理想。这表明DC/肿瘤融合细胞疫苗的制备需要进一步的改进，暗示了可能存在破坏这些疫苗抗肿瘤的免疫机制。因此，如何研究一种能提高融合细胞疫苗抗肿瘤效应的方法，是本领域技术人员亟待解决的难题。

发明内容

本发明的目的在于针对上述存在的科学问题，提供提高融合细胞疫苗抗肿瘤效应的方法。