[发明专利]一种抗葡萄球菌的宽谱噬菌体编码裂解酶及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗葡萄球菌的宽谱噬菌体编码裂解酶及制备方法和应用，属于生物技术领域。所述裂解酶核苷酸序列如Seq ID NO.1所示，氨基酸序列如Seq ID NO.2所示；该裂解酶用于防治多种葡萄球菌，该抗葡萄球菌的宽谱噬菌体嵌合裂解酶可以单独或复配使用，或制备成酶制剂，用以防治由葡萄球菌引起的各种污染和感染，特别是奶牛养殖场中由葡萄球菌引起的奶牛乳房炎感染，具有极高的防治效果，且安全无毒副作用。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种抗葡萄球菌的宽谱噬菌体编码裂解酶及制备方法和应用。

背景技术

葡萄球菌广泛分布于空气、饮水、地面、物体表面及饲料。人及畜禽的皮肤、黏膜、肠道、呼吸道及乳腺也有寄生。致病性葡萄球菌引起各种化脓性感染、败血症及脓毒败血症，污染食品时，可引起食物中毒。根据生化反应和产生色素不同，葡萄球菌属有20多种，其中金黄色葡萄球菌(Staphylococcu saureus)是一种重要的人兽共患病原菌，可以引起伤口感染、心内膜炎、骨髓炎、中毒性休克综合征等多种疾病。除金黄色葡萄球菌外其余种葡萄球菌可以称为凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase-negativestaphyloeocci，CNS)，如：表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、溶血葡萄球菌、缓慢葡萄球菌等，主要为条件致病菌，引起人和动物持续性感染。葡萄球菌也是感染奶牛乳腺炎的主要致病菌，引起牛奶中体细胞数(Somaticcellcount，SCC)升高，严重影响产奶量及牛奶质量，严重威胁食品安全。

金黄色葡萄球菌可引起奶牛乳腺炎，降低奶牛的产奶量和牛奶质量，从而给奶牛养殖行业带来巨大损失。目前，抗生素仍被视为控制奶牛乳腺炎的唯一方法。然而，抗生素的大量使用增强了病原菌的耐受性，尤其在畜禽养殖业中由于抗生素的滥用，导致金黄色葡萄球菌多重耐药性问题日趋严重，特别是对青霉素类药物具有严重的耐受性，最典型的代表是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)。因此寻求一类不易诱导细菌产生耐受性，并且能够高效对抗由耐药金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎的新型抗菌制剂尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗葡萄球菌的宽谱噬菌体编码裂解酶及其制备方法和应用，为控制由耐药性性金黄色葡萄球菌引致的奶牛乳腺炎提供新的抗菌制剂，以实现减量化使用抗生素，为生态养殖提供新策略。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种抗葡萄球菌的宽谱噬菌体编码裂解酶，其核苷酸序列如Seq IDNO.1所示，氨基酸序列如Seq ID NO.2所示。

进一步的，所述裂解酶具有酰胺酶催化结构域和SH3b结合结构域。

本发明还提供一种所述的裂解酶的制备方法，包括以下步骤：

(1)根据裂解酶的基因序列设计引物，并在两条引物的5’端插入pET28a连接接头，进行PCR扩增，反应结束后，将产物采用1％的琼脂糖凝胶电泳检测，并用胶回收试剂盒回收PCR扩增产物；其中，引物序列如下：

F：5’-GGTACCCTCGAGGGATCCATGGCTAAGACTCAAGCAGAA-3’；

R：5’-CTGCAGGTCGACAAGCTTTTAACTCTTGAATGTCCCCCA-3’；

PCR反应体系：引物F 2μL，引物R 2μL，噬菌体YNP1基因组2μL，PrimeSTAR MaxPremix(2×)25μL，去离子水19μL；

PCR反应条件：98℃ 3min；98℃ 10s，55℃ 15s，72℃ 15s，30个循环；72℃ 5min；