[发明专利]一种重组人源III型胶原蛋白及其原核表达方法有效
| 申请号： | 201911384510.2 | 申请日： | 2019-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN111087463B | 公开（公告）日： | 2021-02-19 |
| 发明（设计）人： | 徐兰举;齐磊;刘鑫;申翠美;杜亚东 | 申请（专利权）人： | 河北纳科生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/78 | 分类号： | C07K14/78;C12N15/12;C12N15/70;C12N15/66;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 石家庄德皓专利代理事务所(普通合伙) 13129 | 代理人： | 刘磊娜 |
| 地址： | 050035 河北省石家庄市高*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 iii 胶原 蛋白 及其 表达 方法 | ||
1.一种重组人源III型胶原蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.如权利要求1所述的人源III型胶原蛋白的编码基因，其特征在于，该编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示。
3.一种包含如权利要求2所述的人源III型胶原蛋白的编码基因的重组表达质粒pET30-1230。
4.根据权利要求3所述的重组表达质粒pET30-1230，其特征在于，所述人源III型胶原蛋白的编码基因插入到表达载体PET30a（+）的酶切位点NdeI和XhoI之间。
5.一种含有权利要求3或4所述重组表达载体pET30-1230的重组基因工程菌，其特征在于，所述重组基因工程菌的宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。
6.一种如权利要求1所述人源III型胶原蛋白原核表达方法，其特征在于，具体包括如下步骤:
（1）基因设计和合成：依据人源III型胶原蛋白氨基酸序列SEQ ID NO:1，反向设计基因序列，进行密码子优化，得到基因序列SEQ ID NO:2，进而根据SEQ ID NO:2所示基因序列，进行全基因合成；
（2）重组表达载体pET30-1230的构建：将所述人源III型胶原蛋白的编码基因SEQ IDNO:2插入到表达载体pET30a(+)的酶切位点NdeI和XhoI之间，通过热激方法转化到宿主菌
（3）转化体BL21(DE3) / pET30-1230的构建：将重组质粒pET30-1230通过热激转化入感受态细胞BL21(DE3)，筛选获得重组基因工程菌；
（4）诱导表达：将获得的重组基因工程菌接入M9培养基中，37℃培养过夜，再以2%的接种量接种到M9培养基中，23℃培养14h，加入终浓度为0.05mM IPTG进行诱导表达，继续培养12h，离心收集菌体。
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