[发明专利]产α-蛇麻烯、8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮的酿酒酵母重组菌及构建方法

权利要求书

1.产α-蛇麻烯、8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮的酿酒酵母重组菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：利用同源重组向酿酒酵母中导入优化的α-蛇麻烯合酶编码基因ZSS1、优化的细胞色素P450酶编码基因CYP71BA1、优化的细胞色素P450还原酶编码基因AtCPR1和优化的脱氢酶编码基因ZSD1^S114A；得到简称重组菌1的产α-蛇麻烯、8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮的酿酒酵母重组菌1；

所述优化的α-蛇麻烯合酶酶编码基因ZSS1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述优化的细胞色素P450酶编码基因CYP71BA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述优化的细胞色素P450还原酶编码基因AtCPR1的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述优化的脱氢酶编码基因ZSD1^S114A的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.权利要求1的方法构建的产α-蛇麻烯、8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮的酿酒酵母重组菌1。

3.权利要求2的产α-蛇麻烯、8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮的酿酒酵母重组菌1发酵产α-蛇麻烯、8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮中的应用。

4.产α-蛇麻烯、8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮的酿酒酵母重组菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：

向重组菌1中导入3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶编码基因tHMG1及法呢基焦磷酸合酶编码基因ERG20，得到简称重组菌2的产α-蛇麻烯，8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮的重组酿酒酵母菌2；

所述3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶编码基因tHMG1的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述法呢基焦磷酸合酶编码基因ERG20的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

5.权利要求4的方法构建的产α-蛇麻烯，8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮的酿酒酵母重组菌2。

6.权利要求5的产α-蛇麻烯，8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮的酿酒酵母重组菌2发酵产α-蛇麻烯，8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮中的应用。

7.产α-蛇麻烯、8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮的酿酒酵母重组菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：利用同源重组用启动子P_HXT1替换重组菌2中的鲨烯合酶编码基因ERG9的启动子P_ERG9得到重组菌3；

所述启动子P_HXT1的核苷酸序列用SEQ ID NO.7所示。

8.权利要求7的方法构建的产α-蛇麻烯，8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮的酿酒酵母重组菌3。

9.权利要求6的产α-蛇麻烯，8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮的酿酒酵母重组菌3发酵产α-蛇麻烯，8-羟基-α-蛇麻烯及花姜酮中的应用。