[发明专利]一株防控腐烂茎线虫的枯草芽孢杆菌ZWZ-19及其应用

说明书

本发明涉及一株用于防控腐烂茎线虫的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZWZ‑19，属于微生物农药技术领域。本发明涉及的菌株ZWZ‑19，已于2019年10月22日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.18718。室内试验表明，该菌株对腐烂茎线虫具有良好的触杀活性。田间试验表明，利用ZWZ‑19菌株发酵液进行马铃薯种薯拌种处理后，对腐烂茎线虫病具有较好的防效，同时该菌株还具有一定的增产效果。

技术领域：

本发明属于微生物农药技术领域，具体涉及一株防控腐烂茎线虫的枯草芽孢杆菌ZWZ-19及其应用。

背景技术：

腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)是世界上一种重要的植物病原线虫，属于迁移性植物内寄生线虫，是国际上重要的检疫性线虫。该线虫寄主范围较广，包括70余种作物和杂草，也可以寄生在土壤真菌的菌丝上，主要寄主是马铃薯和甘薯，其他常见寄主有鸢尾、郁金香、大菖蒲、甜菜、三叶草、大丽菊、胡萝卜、花生、向日葵、大豆、番茄、烟草、甘蔗、大麦、小麦等及多种野生植物，腐烂茎线虫病是一种极难防治的土传病害。近年来随着我国马铃薯、甘薯面积的不断扩大，腐烂茎线虫的分布也越来越广，主要发生在河北、河南、北京、山东、江苏、安徽、吉林、内蒙古等12个省(区)，并成为北方甘薯产区最严重的病害；受害田块一般可减产30％-50％，严重的可减产80％以上，甚至绝收。威胁着马铃薯、甘薯等相关产业的发展，对地方经济产生了十分不利的影响。目前对于腐烂茎线虫病的防治主要以化学防治为主，使用的大多数杀线剂严重污染环境，破坏生态平衡。近年来，随着可持续农业的快速发展，人们已将防治线虫病害的工作重点转向了生物防治。

植物线虫病害的生防因子包括真菌、细菌、放线菌、病毒和原生动物等。Becker等(1988)报道了假单胞菌属(Pseudomonas)和芽孢杆菌属(Bacillus)对根结线虫病害有防治作用。刘金辉等(2012)报道苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)菌株对甘薯茎线虫具有高毒力。姚思敏(2018)报道巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)菌株D45发酵液及挥发性物质对马铃薯腐烂茎线虫具有杀线活性。因此，针对腐烂茎线虫病害进一步筛选高活性的生防因子，并加快微生物杀线剂的研发与应用，对于其有效防控意义重大。

发明内容：

本发明针对腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)筛选生防因子，将微生物菌株常规液体发酵后，利用发酵液对线虫进行处理，以评价其触杀效果。

本发明筛选获得的菌株ZWZ-19被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏日期：2019年10月22日；保藏登记入册的编号：CGMCC No.18718。

本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZWZ-19在室内试验中显示对腐烂茎线虫具有良好的触杀效果，田间试验表明该菌株对腐烂茎线虫病有显著的防治效果。

本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZWZ-19菌剂可以在马铃薯播种时拌种处理。

本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZWZ-19菌株是通过平板活化后，再经液体发酵制备，其具体方法如下：

1.平板活化

培养基配方为Luria-Bertani培养基(LB)：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCL5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。菌株接种于LB平板上，培养2d～3d。

2.液体发酵培养