[发明专利]一种华支睾吸虫大量纯净虫卵收集的方法

权利要求书

1.一种华支睾吸虫大量纯净虫卵收集的方法，其特征在于：包括如下步骤：

第一步：生理盐水进行高压灭菌，高压灭菌后的生理盐水加入双抗，配置在生理盐水中的双抗浓度为100μg/ml；

第二步：收集成虫，收集50条左右；

第三步：用第一步配置的生理盐水清洗成虫，清洗无杂质后，先用含有双抗的培养基RPMI-1640清洗五次，培养基RPMI-1640含有双抗的浓度为100μg/ml；然后把清洗后的成虫放入含有双抗的RPMI-1640培养基进行培养，培养基RPMI-1640含有双抗的浓度为100μg/ml；注意此步骤应在细胞间进行；此步骤的成虫是在培养皿中清洗和培养；

第四步：将第三步的成虫从培养皿中取出放到培养瓶中，培养瓶中装有含有双抗的RPMI-1640培养基，培养基RPMI-1640含有双抗的浓度为100μg/ml；规定1ml培养基中放入5-8条成虫，然后把培养瓶置于37度的5％二氧化碳恒温培养箱中培养18h；

第五步：吸取第四步中二氧化碳恒温培养箱中培养瓶的全部清液保存，然后向培养瓶中加入培养基，培养瓶再次置于5％二氧化碳恒温培养箱中进行培养18h，加入的培养基与吸取的培养基体积一致；

第六步：18小时后，把5％二氧化碳恒温培养箱中培养瓶取出，吸取培养瓶的全部清液保存，然后向培养瓶中加入培养基，培养瓶再次置于5％二氧化碳恒温培养箱中进行培养18h，加入的培养基与吸取的培养基体积一致；

第七步：重复第六步，直到发现虫体崩裂，则停止操作；

第八步：对收集的全部清液进行离心，转速5000RPM，时间30min，然后弃掉上层清液，用滤器过滤一下，透析之后就可以用收集ES抗原了，余下的沉淀即为大量的虫卵。

2.根据权利要求1所述的一种华支睾吸虫大量纯净虫卵收集的方法，其特征在于：第八步还可以为：对收集的全部清液进行离心，转速5000RPM，时间30min，保存上层清液，用滤器过滤一下，透析之后就可以用收集ES抗原了，余下的沉淀即为大量的虫卵。